中药化学成分传统提取分离方法经验浅谈.docVIP

中药化学成分传统提取分离方法经验浅谈 1.在从事研究之前一定要认真查阅与课题相关的文献资料。做到心中有数，即怎样来提取是最好的？怎样来解析植物中特征类型的化合物？别人都做了哪些方面的工作了？等等。象我的课题植物主要含有生物碱类成分，我就选择先用稀酸浸泡，再用阳离子交换树脂交换富集，就把叶绿素，多糖等杂质除掉了，同时生物碱含量也提高了，给后来的分离工作带来了很大的帮助。 2.天然药物或中药一定要在做之前确定其基原（植物来源）。这很重要，不然会给文献检索带来麻烦。 3.要抓重点，学会放弃。因为我觉得一个植物中的化学成分成千上百。我们不可能把它全部拿到，所以我们实验中要拿那些量稍大的、容易拿的。不要上了很久的柱子，分到后面得到的量还不够打谱就不好了。你可以从最后结题剩下的几百个浸膏流份瓶子看到这一点。 4.实验过程中要小心每一步，三思而后行。因为你的浸膏来之不易。往往不再给你重来的机会。 5.要给自己信心，要敢于想，敢于尝试。 跑板： 在上样之前，你必须熟知你样品是处于什么状态，特别是自己要的化合物的 点是处于什么状态，选用什么柱子（粗长砍断；细长快冲纯化除杂），什么固定相（硅胶，正相柱除极性小的化合物；凝胶，一般用于纯化，分离离得较近的点，反相硅胶，除极性大的杂志等） 选梯度，淋洗剂的选择。 感觉上要使所需点在rf0.2～0.3左右的比较好。不要认为在板上爬高了分的比较开，过柱子就用那种极性，如果rf在0.6，即使相差0.2也不容易在柱子上分开，因为柱子是一个多次爬板的状态，可以通过公式的比较：0.6/0.8一次的分离度，肯定不如（0.2/0.3）的三次方或四次方大。 (1)、洗脱剂的选择，一般是以第一个点在TLC上Rf值0.2～0.3为基础，稀释一倍进行第一个样品点的洗脱，并在洗脱下第一个点后更换下一个点的洗脱极性（0.2～0.3稀释一倍）。 3．样品称量200-300目硅胶，称30-70倍于上样量；如果极难分，也可以用100倍量的硅胶H。 关于柱子的尺寸 选柱子根据你样品量为选，应该是粗长的最好。柱子长了，相应的塔板数就高。柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是样品层比较薄），这样相对的减小了分离的难度。试想如果柱子十厘米，而样品就有二厘米，那么分离的难度可想而知，恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。而如果样品层只有0.5厘米，那么各组分就比较容易得到完全分离了。当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了。 现在见到的柱子径高比一般在1：5～10，书中写硅胶量是样品量的30～40倍，具体的选择要具体分析。如果所需组分和杂质分的比较开（是指在所需组分rf在0.2～0.4，杂质相差0.1以上），就可以少用硅胶，用小柱子（例如200毫克的样品，用2cm×20cm的柱子）；如果相差不到0.1，就要加大柱子，我觉得可以增加柱子的直径，比如用3cm的，也可以减小淋洗剂的极性等等。 用石英做柱子，然后用HF254做固定相，这样在柱子外面用紫外灯一照就知道产品在哪里了，但没有验证过。 5. 2.关于湿法、干法上样 湿法省事，一般用淋洗剂溶解样品，湿法省事，一般用淋洗剂溶解样品，有些样品溶解性差，能溶解的溶剂又不能上柱（比如DMF,DMSO等，会随着溶剂一起走，显色是一个很长的脱尾），这时就必须用干法上柱了。样品和硅胶的量有一种说法是1：1，我觉得是越少越好，但是要保证在旋干后，不能看到明显的固体颗粒（那说明有的样品没有吸附在硅胶上）。 湿法上样，搅成匀浆。加入干硅胶体积一倍的溶剂用玻璃棒充分搅拌。如果洗脱剂是石油醚/乙酸乙酯/丙酮体系，就用石油醚拌；如果洗脱剂是氯仿/醇体系，就用氯仿拌。如果不能搅成匀浆，说明溶剂中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不与水配伍走分配色谱的话，必须预先用无水硫酸钠久置干燥。氯仿用无水氯化钙干燥，以除去1%的醇。如果样品对酸敏感，不能用氯仿体系过柱。 装柱。将柱底用棉花塞紧，不必用海沙，加入约1/3体积石油醚（氯仿），装上蓄液球，打开柱下活塞，将匀浆一次倾入蓄液球内。随着沉降，会有一些硅胶沾在蓄液球内，用石油醚（氯仿）将其冲入柱中。 柱子下面的活塞一定不要涂润滑剂，会被淋洗剂带到产品中的，可以采用四氟节门的。干法和湿法装柱觉得没什么区别，只要能把柱子装实就行。装完的柱子应该要适度的紧密（太密了淋洗剂走的太慢），一定要均匀（不然样品就会从一侧斜着下来）。书中写的都是不能见到气泡，我觉得在大多数情况下有些小气泡没太大的影响，加压可以消除气泡，或者放置过夜，如果硅胶还没沉淀下来，没有上样品，可以重新用玻璃棒搅拌一下，让它重新上样。 变花是由于柱子中气泡的存在，放置过夜和过快更换洗脱极性都会产生气泡。装柱子时一定要搅拌使得硅胶中的气体尽量拍干净。更换极性时，我一般从50:1到20:1是逐渐更换的