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实验十二 pH对酶活性的影响 Exp. 12 Effect of Changes in pH on Enzyme Activity 一、实验原理 酶的活性，受环境pH的影响极为显著，通常只在一定的pH范围内，酶才表现出活性，当酶活性达到最高时的pH值称为该酶的最适pH(optimum pH )，低于或高于最适pH时，酶的活性依次降低，酶的最适pH受底物性质和缓冲液性质的影响。 不同酶的最适pH不同。但与该酶在生物体内存在的部位有关，例如高等动物的胃蛋白酶最适pH为1.5～2.5，而胃液的pH与此相近，胰蛋白酶的最适pH为8左右，而十二指肠附近肠道的pH值近乎中性。 本实验使用唾液淀粉酶(salivary amylase )来说明pH对酶活性的影响。唾液淀粉酶的最适pH为6.8，有人发现该酶在磷酸缓冲液中，其最适pH为6.4～6.6。 二、实验用品 1、材料 新鲜并稀释200倍的唾液 2、试剂 （1）0.5%淀粉溶液:称取0.5g淀粉溶于0.3%NaCl溶液中。 （2）0.2M磷酸氢二钠溶液 （3）0.1M柠檬酸溶液 （4）碘化钾—碘液:将KI 20g及碘10g，溶于100ml蒸馏水中，使用前，稀释10倍。 3、仪器设备 试管及试管架、2ml和5 ml吸量管、恒温水浴锅、滴定管、50 ml锥形瓶 三、方法和步骤 1、取8个50毫升锥形瓶，编号。 按下表中的比例，用吸量管加入0.2M磷酸氢二钠溶液和0.1M柠檬酸溶液，制备 pH 5.0～8.0 的8种缓冲溶液。 表1.pH 5.0～8.0 的8种缓冲溶液的制备 锥形瓶号 0.2M磷酸氢二钠/ml 0.1M柠檬酸/ml 缓 冲 液pH 1 2 3 4 5 6 7 8 5.15 6.05 6.61 7.28 7.72 8.24 9.08 9.72 4.85 3.95 3.39 2.72 2.28 1.76 0.92 0.28 5.0 5.8 6.2 6.6 6.8 7.0 7.4 8.0 2、由8个锥形瓶中，各取缓冲液3ml，分别注入8支带有编号的试管中，随后于每个试管中，添加0.5%淀粉溶液2 ml和稀释200倍的唾液2 ml。(增加1个和5号内容相同的试管，作为检验淀粉的水解程度)向各试管加入稀释唾液的时间间隔各为1分钟。将各试管内容物混匀，并依次置于37℃恒温水浴中保温。 3、5分钟后（视酶的活性而定，一般5～10分钟），每隔1分钟由第5号试管之一吸取1滴混合液，置于白磁板上，加一小滴碘化钾—碘溶液，检查淀粉的水解程度，使实验结果成为橙黄色时，向所有试管依次添加1～2滴碘化钾-碘溶液，充分混匀。加碘化钾溶液时间间隔，由第一管起，也均为1分钟，摇匀，观察各试管内容物的颜色。 四、实验结果 根据各试管内容物呈现的颜色，可以看出pH对唾液淀粉酶活性的影响。指出其最适pH值。 注意事项 掌握第5号试管的水解程度是本实验成败的关键。 五、思考题 1.pH对酶活性有何影响？ 2.如何测定一个酶的最适pH?