大白菜游离小孢子培养技术的研究初报.pdfVIP

大白菜游离小抱子培养技术研究初报 方淑桂 陈文辉 曾小玲 朱朝辉 (福州市蔬菜科学研究所 福州 350012) 提 要:以中晚熟大白莱为试材进行游离小袍子培养研究.结果表明，不同基因型的大白菜小 抱子反应不同，拧饱炮弹型的反应频率高达75%并胚胎发生能力也高其中18-1-4-2产胚率高 达120胚/截 NLN中添加适全活性炭对小抱子胚胎发育的同步性有很好的作用;33C26h热激 处理是诱导小袍子胚胎发生的必要条件、在ms中附加1.28球脂的培养扣鑫宜植株再生，成苗 率达62%，并培育出200株健壮苗;在工。一25℃下生长的供体植株适宜小袍子培养. 关键词:大白菜 游离小抱子培养 基因型 大白菜游离刁袍子培养，从Sat犷，(1989)在春性早熟类型上培养得到再生植株后，国内相继有一 些科研院所开展这项工作，最成功的有栗根义1’;等利用游离小泡子培养育成大白菜新品种并应用于生 产;北京蔬菜研究中亡研究培育出优质新品种桔红心，也在生产」龙佣。游离刁袍子培养的特点是可以 在1-2年内获得大量纯系 (双单倍体)，可缩短育种年限4--5年。以往研究认为，早熟大白菜材料容易 培养出刁、袍子植株，冬性或半冬性类型品种/ia包子培养比较困难。为探讨南方半冬性大白菜刁饱子培养 的反应频率及培养条件，本所于2001年开始该项研究并获得成功，现已培育出一批健壮苗，2002年4 月30日已通过专家阶段性验收。 1材料与方法 1.1试验材料 选用不同类型的中晚熟大白菜优良品种(品系)40份，由本所大白菜组提供 9月中旬 播种，10月上旬定植，12月下旬大株留种.2月中旬开花。利用自然条件及一般田间管理水平栽培。 1.2试验方法 根据曹鸣庆等研究叹取主花序上。.2-0.3二的花蕾，用6%的次抓酸钠溶液表面消毒 15min，无菌水冲洗3次。然后将花蓄置于研钵中，加人经高温灭菌的B5洗涤培养液，用玻璃棒轻轻挤 压花蕾使刁袍子充分游离到溶液中。以5。二孔径尼龙网过滤并将loml的悬浮液收集于离心管1000r /min下离心3min弃去上清液再加人B5洗涤液离心重复3次弃去上清液加人浓度为。.5mg.1-lNAA 和。.05mg.1-16BA的NLN-82液体培养基，小抱子密度调整为1X105-2X105个/ml。分装于直径6cm 的培养皿中，每皿3ml，每皿加人浓度为log/l的活性炭0.05ml，石蜡肪胜寸口后，将培养皿置于33℃恒 温培养箱处理26h,然后于25℃条件下暗静止培养。15d后将子叶期胚转到22℃下光照培养待1-2周 胚转绿并发育成0.4cm以上转到1.2%琼脂无激素的ms固体培养基上诱导芽。两周后将再生株转到大量 元素减半的ms固体培养基上继续培养 过两周继代一次 再生株可生长成4-5片叶子的健壮苗 即可驯 化。将试管苗移出并洗净培养基 ，种植于直径8^-10二的营养杯中，基质的配比为草炭土与蛙石按2:1 混均，搜盖塑料膜或大烧杯保湿，大约十d后试管苗即可成活，揭去舰盖物，适a,尧水，浇肥，精b管 理。 结果与分析 2.1小抱子胚胎诱导 2.1..1基因型对小抱子胚胎发生的影响试验结果，高代亲本与杂交一代品种d，ll?9子培养的胚胎发生 能力没什么差异，但基因型不同赵荆良大见表 ‘供试30份材料中，有15份是拧抱类型10份发生胚胎 205 胚诱导率为67.78，且出胚率高最高的是18-1-4-2每个蕾胚产量达100多个。而叠抱类型15份有5 份发生反应，胚诱导率只有33.3%. 2.1.2供体植株的生长环境对/，JA子胚胎的影响 供体植株于2月中旬开始开花至3月27日气温在 11^-26℃之间期间做了20份材料有14份诱导出压 而3月28-4月15日气温在18^32℃期间培养 了10份 只有1份有胚状体产生。由此可见供体植株的生长环境对i，11}m子培养影响很大适宜温度为10 -25C超过28C刁袍子诱导率大大降低。 2.1.3活性炭对小抱子胚胎的影响 研究表明不加活性炭的小抱子发育迟而多最多的每个蕾高达 12。个胚(表2);而加。.12ml/皿活性炭的胚产量相对减少，但胚胎发生早8d即可肉眼见到;每皿加 0.05m1的胚产量较多，发育正常。 2.2小抱子胚胎的发育 2.2.1活性炭对胚胎发育的影响 试验得出，不加活性