凡纳滨对虾内源蛋白酶的分离纯化和酶学特性研究.pdfVIP

2011年中国水产学会学术年会论文摘要集 凡纳滨对虾内源蛋白酶的分离纯化及酶学特性研究 吴燕燕1，王萍1，2李来好1，杨贤庆1，刁石强 (1．中国水产科学研究院南海水产研究所，广东广州 510300；2．上海海洋大学，上海，201306) 摘要：以凡纳滨对虾虾头为原料，采用层析及电泳技术等对凡纳滨对虾虾头蛋白酶进行研究， 结果表明：将虾头匀浆在pH7．0条件下浸提1h，冷冻离心得到粗酶液，采用硫酸铵盐盐析、 Q G～100凝胶柱分离纯化，得到蛋白酶纯品。针对 HitrapHP阴离子交换层析柱及Sephadex 其生化特性的研究表明： SDS—PAGE电泳为单一蛋白酶带，分子量为16。2kDa；此酶最适反应 的pH条件为10，在pH7．0～10．0的条件下稳定；最适温度为40℃，热稳定性好。金属离 子ca2+、M92+、cu2+、Mn2+对蛋白酶有一定的激活作用，zn计、H，对蛋白酶有完全抑制作用。 3种有机试剂中，丙酮对蛋白酶有较强的激活作用，乙醇在低浓度时有明显的激活作用，但 丙三醇对此酶的抑制效果明显。丝氨酸蛋白酶抑制剂STI、TLCK、PMSF对该酶有强烈的抑制 作用，胃蛋白酶抑制剂、TPCK、EDTA对此酶抑制效果不明显，表明这是一种丝氨酸蛋白酶。 各种氨基酸修饰剂对此酶的修饰作用表明此酶非巯基酶，色氨酸、组氨酸、丝氨酸是构成该 酶活性中心的必需基团，精氨酸与该酶酶活有一定的关系，氨基并非该酶活性中心的必需基 团。 关键词：凡纳滨对虾；内源蛋白酶；分离纯化；酶学特性 Purificationandcharacteristicsof from endogenesisprotease … ● Va胛以a聊PZ Lttopenaeus WU Lai．ha01，YANG 1 Yan．yanl，WANGPin91，2，LI Xian．qin91，DiaoShi．Qiang (1．SouthChinaSeaFisheriesResearchInstitute，ChineseAcademyofFishery Sciences，Guangzhou Ocean 510300，China；2．ShanghaiUniversity，Shanghai，201306，China) the Abstract：Thefrom headsof vannamefwerestudied the protease Litopenaeus using of and theresultsshowedthat：Atier biotechnologychromatographyelectrophoresis．and extractioninbufferat lasted ammonium pH7．0 lh，centrifugalization，saltingusing sulfate，HiVap HPanion and G一100 column，the were Q exchangechromatographySephadexgel pureprotease obtainedfromtherawmaterial．Thebiochemicalcharacteristicsofthis werealsostudied．