鸡胚胎心脏祖细胞生物学特性的研究.pdfVIP

鸡胚胎心脏祖细胞生物学特性研究 王磊1，赵倩君1，侯玲玲12,浦亚斌1，白春雨1，菱旦狴1，关伟军r，马月辉P 1中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 2北京交通大学生命科学与生物工程研究院，北京100044 引言 心脏祖细胞(cardiacprogenitorcells，CPCs)是作为一种未成熟的但可以定向分化的心脏 细胞，能增殖分化为前体细胞，受祖细胞性质的决定，这些前体细胞只能分化为一种主要心 脏细胞类型(如心肌细胞、心脏平滑肌细胞或血管内皮细胞)。CPCs能够分化成成熟心脏细 胞的特性使它成为目前干细胞研究领域中一颗耀眼的新星，科研工作者对它研究有望能为心 脏疾病的治疗带提供一种新的手段，为心脏病患者的康复带去希望。 材料方法 孵化6d一1ld北京油鸡鸡胚，剥离心脏，手术镊撕碎心脏洗涤数次。使用组织块培养法 及酶消化分离培养法，所得细胞进行传代培养。取第3代和第8代ECSCs进行免疫组化和 诱导分化，心肌细胞诱导液采用青霉素、链霉素、HEPES、Glu、FBS、马血清、DMEM 基础培养基、M199基础培养基，联合诱导12天后免疫组化和RT-PCR检测cTnT的表达。 基础培养基，联合诱导lO天后免疫组化和ImPCR检测Q．SMA的表达。 结果 1 组织块培养法得到的细胞活性较好，大约7d左右开始形成集落，但数量较少，传第 二代以后细胞形态单一，成纤维状细胞居多；酶消化法经过改进后，能够得到大量目的细胞， 细胞培养5d左右开始形成克隆，数量较多，第二代代以后细胞形态变化不大，大部分细胞 呈多形性，如圆形，多角形等，细胞核质比较大。酶消化法经过纯化扩增，在体外培养条件 下能传到第20代。 2对第3代和第11代的鸡胚心脏祖细胞进行免疫化学及RT-PCR鉴定，结果显示鸡胚 心脏祖细胞均能表达Isll、GATA4、Flkl和Nkx2．5四个标志物。 3鸡胚心脏祖细胞在诱导条件下能够分化成为成熟心肌细胞和平滑肌细胞，诱导后免 疫组化及分子生物学鉴定结果显示：诱导后的心肌细胞能发生节律性收缩，cTnT表达呈阳 性；诱导后的平滑肌细胞Q．SMA表达呈阳性。 讨论与结论 本试验通过对不同做样方法的比较，最终认为酶消化法适合鸡ECPCs的常规分离培养。 心脏祖细胞成功向心肌细胞和平滑肌细胞诱导分化。诱导分化而成的成熟心肌细胞能够进行 节律性收缩，这为心脏祖细胞的分化能力提供了有力的试验证据。本试验只是在体外细胞水 平上做了一定的研究，距离临床应用还较远，为了进一步证实ECPCs在体内能够分化成为 成熟心脏细胞并且能够融合进整个心脏内发挥功能，还需进行下一步体内试验。 致谢 助。 ， +通讯作者： 马月辉，男，1964年生，研究员，博导，E．mail：Yuehui．ma@263．net