椰心叶甲感染绿僵菌后的组织病理变化.docVIP

椰心叶甲感染绿僵菌后的组织病理变化 (， 黄俊生* （中国热带农业科学院环境与植物保护研究所，热带作物生物技术国家重点实验室，海口 571101） 摘要：对感染绿僵菌的椰心叶甲幼虫进行的组织切片观察表明，绿僵菌可通过体表及气道侵染虫体，其中经体表侵染是主要的方式。接菌后第一天即可在血腔中发现萌发的孢子，感染早期可见大量血细胞在皮层下的聚集，血腔中的孢子随血液循环到达各组织器官，并可逐渐侵入脂肪体、肌肉、食道、气管、腺体等组织Brontispa longissima larvae infected by Metarhizium anisopliae WANG Jiu-Hui, HUANG Jun-Shen (Environment and Plant Protector Institution, State Key Biotechnology Laboratory for Tropic Crop, Chinese Academy of Tropic Agriculture, Haikou 571101, China) A histopathological study on Brontispa longissima larvae infected by Metarhizium anisopliae showed that the fungi infected body mainly by penetrating the cutuile, however, it also could infected throug spiracle. The conidia could be found in haemocoel 24h after infected, and a large number of haemocytes congregated just beneath the epidermis. Invasion of the hyphae to host tissues showed no selection, and the pathological changes occurred on all infected tissues and organs, including fat body, muscle, mid gut, salivary gland and trachea. Key words: Brontispa longissima; Metarhizium anisopliae; histopathologic 椰心叶甲（Brontispa longissima）属鞘翅目，铁甲科，可危害棕榈科多种重要经济林木，其中椰子是最重要的寄主，是一种重要的危险性害虫。其成虫和幼虫以椰子等寄主未展开的心叶表皮组织为食，导致叶片的枯萎、坏死，严重时出现整株死亡。椰心叶甲主要分布于太平洋岛屿，但近年来有全球扩散的趋势，我国的海南、广西、广东、台湾等地均发现了椰心叶甲。 绿僵菌（Metarhizium anisopliae）是虫生真菌的主要类群之一，寄主范围广，致病力强，对人、畜、作物无毒害，是一种应用前景良好的虫生真菌，目前已用于多种害虫如蝗虫、金龟子、白蚁等的防治[]。利用绿僵菌对椰心叶甲进行生物防治是一种有效的措施[]，但是目前尚没有关于绿僵菌对椰心叶甲入侵及致病过程的研究报道。本文通过对椰心叶甲幼虫感染绿僵菌后的组织切片观察，研究椰心叶甲感染绿僵菌后的病理学变化，为明确绿僵菌对椰心叶甲的致病机理提供理论依据。 1 材料与方法 1.1供试虫源 供试椰心叶甲采自海南海口，采集后置于养虫箱内，室温25-30(C，相对湿度90%，以海南椰子未展开的嫩叶饲养，每3天更换一次新鲜叶片。取4(5龄幼虫用于试验。 1.2 绿僵菌侵染 绿僵菌MA-3，由本室从椰心叶甲僵虫中分离保存，以PPDA固体培养基培养，一周后收获孢子，以0.1%吐温-80配成1(107孢子/ml的悬浮液，采用体表喷雾和饲喂法进行接种体。体表喷雾法：将1(107孢子/ml的悬浮液均匀喷洒在椰心叶甲幼虫体表至虫体表面湿润，自然晾干后移至虫箱中以新鲜叶片饲养。饲喂法：将新鲜的椰子嫩叶在1ⅹ107孢子ml的悬浮液中浸1分钟，晾干后用饲喂实验幼虫。 1.3 组织切片的制备 分别在绿僵菌浸染后的第1，2，3，4，5天取样，以Bouuin氏固定液对虫体进行固定，2天后转移至70%酒精中保存。常规石蜡切片法进行组织切片，切片厚度8(m，苏木精伊红染色，光学显微镜下进行观察拍照。 2 结果 2.1 椰心叶甲感染绿僵菌后的症状 2.2 绿僵菌的侵入的途径及侵染过程 对接菌后不同时间的组织切片观察表明，采用体表喷雾接菌后，在接菌后第一天绿僵菌即可穿透幼虫的表皮，并且在血腔中出现萌发的孢