人端粒酶RNA基因荧光原位杂交检测在宫颈细胞学检查应用.pdfVIP

中华医学会病理学分会2010年学术年会论文汇编 大会发言 A-11 人端粒酶RNA基因荧光原位杂交检测在宫颈细胞学检查中的应用 高莉，朱炎，刘素萍，朱明华 第二军医大学长海医院病理科200433 摘要 目的探讨人类染色体端粒酶RNA基因(hTERC)扩增的荧光原位杂交(FISH)检测在 宫颈脱落细胞防癌筛查中的意义。 方法收集146例宫颈液基细胞学样本，应用间期双色 荧光原位杂交(FISH)技术检测hTERC基因的扩增情况，与细胞学和组织学结果对照结果杂 交成功120例(细胞学阴性20例、细胞学阳性100例)。hTERC基因扩增的阳性率与细胞学 异性为82．4％。阳性预测值89．5％，阴性预测值65．1％，低级别以下病变的hTERC阳性率与 的出现，检出高级别以上病变的敏感性提高到81．2％。结论hTERC基因扩增的FISH检测 有助于辅助细胞学诊断，提高高危病变的检出率。实验结果判断除参照阈值之外，还应结 合hTERC基因的扩增类型，出现高倍扩增亦提示高级别以上病变。 人类染色体端粒酶RNA基因(hTERC)扩增与宫颈癌的发生存在密切关系，近年来国内 外已有利用荧光原位杂交(FISH)技术检测宫颈癌hTERC基因扩增情况的文献报道【I钏，但 hTERC基因的扩增类型与宫颈癌前病变的关系少有报道，该方法在预测宫颈癌前病变的癌 变危险性方面的意义尚有待于进一步大样本的研究。本研究利用间期双色FISH技术检测 了宫颈脱落细胞学样本中的hTERC基因异常扩增情况，并分析该基因扩增的阳性率及扩 增类型与宫颈病变之间的关系，以探讨FISH技术检测宫颈细胞hTERC基因扩增的临床意 义。 材料和方法； 1．材料：收集2008年2月至10月上海长海医院妇科门诊就诊146例患者的宫颈新 柏氏液基薄层细胞学(TCT)检测标本进行FISH检测，其中26例FISH实验失败，未行进一 步统计分析。其余120例中20例细胞学报告为阴性，100例细胞学报告阳性。细胞学诊断 标准参照子宫颈细胞学Bethesda报告系统。 2．样本制备：将TCT检测剩余的细胞学样本5～10ml离心收集细胞，胶原酶 Hank’s m(0．0059／5ml8ss)37℃消化20min，去离子水37℃低渗处理40min，固定液(甲醇： 冰醋酸=3：1)室温固定lOmin×3次。调整悬液浓度后滴片，56℃烤片过夜。 37℃消化 lOmin， 2xSSC室温5min×2次，梯度乙醇脱水干燥，加热至56℃。避光加探针于玻片杂 交区域，加盖玻片，橡皮胶封边，于原位杂交仪中75℃变性5min，45℃杂交过夜。杂交 后46℃下洗涤50％甲酰胺／2×SSC5minx3次，2xSSC10min，0．1％NP-40／2×SSC5min．70％ DAPI，加盖玻片暗处放置lo~20mira荧光显微镜下观察。 乙醇3min，干燥后加159l 4．结果判断：正常细胞核内绿红信号比为2：2，单个细胞内出现2个以上红色信号 的细胞判为阳性细胞。在20个细胞学报告为阴性的FISH检测标本涂片上每个随机计数200 ．3l- 大会发言 中华医学会病理学分会2010年学术年会论文汇编 个细胞，计算阈值。阈值=平均数(M)+3×标准差(SD)。待检玻片中选择背景干净、杂交信 号强、轮廓清楚、无重叠的细胞，随机观察100个细胞，分别计数每个细胞内的红绿荧光 信号。每张玻片上阳性细胞数大于阈值者判断为阳性玻片。 5．统计学处理：统计学分析应用SPSSl3．0分析系统，等级资料的相关性检验采用 Spearman秩相关分析，多组样本率的比较采用X2检验。 结 果 1．宫颈细胞学诊断与组织学诊断对照：所有细胞学阳性的病例均获活检组织病理学 诊断结果(表1)。 表1 细胞学与组织学诊断对照 算：阈值=平均数(M)+3×标准差(SD产2．42+3x1．29--6．29 3．FISH检测阳性率与组织学等级的关系(表2)：hTERC基因的扩增率随组织学级 别的增高而增