志贺菌及三糖铁原理.docVIP

志贺氏菌的检验 ?? 发布日期：2010-09-01??浏览次数：4375 核心提示：?一、增菌　　称取检样25g，加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以8000-10000r/min打碎1min，或用 一、增菌　　称取检样25g，加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以8000-10000r/min打碎1min，或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用金属匙或玻璃棒研磨使其乳化，于36℃培养6～8h。 　　培养时间视细菌生长情况而定，当培养液出现轻微混浊时即应中止培养。 二、分离和初步生化试验 　　取增菌液1环，划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平板1个；另取1环划线接种于麦康凯琼脂平板和 　　志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发酵乳糖的菌落。 　　附：HE琼脂平板原理及照片 　　　SS平板原理及照片 　　　麦康凯琼脂平板照片　 　　　伊红美蓝琼脂平板照片 　　　在沙门氏菌的检验中，有时也使用HE、SS平板进行初步筛选。 　　　SN 0332-94 出口食品中沙门氏菌(辛酯酶荧光)检验方法 　　挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各1管。一般应多挑几个菌落，以防遗漏，经36℃培养18～24h，分别观察结果。 　　附：葡萄糖半固体原理及结果。 　　　 　三糖铁琼脂现象及原理分析 　　下述培养物可以弃去：　　a.　在三糖铁琼脂斜面上呈蔓延生长的培养物；　　b.　在18～24h内发酵乳糖、蔗糖的培养物；　　c.　不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的培养物；　　d.　产气的培养物；　　e.　有动力的培养物；　　f.　产生硫化氢的培养物。　　 　　凡是乳糖、蔗糖不发酵，葡萄糖产酸不产气(福氏志贺氏菌6型可产生少量气体)，无动力的菌株，可做血清学分型和进一步的生化试验。 三、血清学分型　　挑取三糖铁琼脂上的培养物，做玻片凝集试验。 　　先用4种志贺氏菌多价血清检查，如果由于K抗原的存在而不出现凝集，应将菌液煮沸后再检查； 　　如果呈现凝集，则用A1、A2、B群多价和D群血清分别试验。 　　如系B群福氏志贺氏菌，则用群和型因子血清分别检查。福氏志贺氏菌各型和亚型的型和群抗原见表1。可先用群因子血清检查，再根据群因子血清出现凝集的结果，依次选用型因子血清检查。　　4种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株，可用鲍氏多价1、2、3分别检查，并进一步用1～15各型因子血清检查。如果鲍氏多价血清不凝集，可用痢疾志贺氏菌3～12型多价血清及各型因子血清检查。 　　附：福氏志贺氏菌各型和亚型的型抗原和群抗原　　四、进一步的生化试验　　在做血清学分型的同时，应做进一步的生化试验，即： 　　葡萄糖铵 　　西蒙氏柠檬酸盐 　　赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶 　　pH7.2尿素 　　KCN生长 　　水杨苷和七叶苷的分解 　　除宋内氏菌和鲍氏13型为乌氨酸阳性外，志贺氏菌属的培养物均为阴性结果。 　。必要时还应做革兰氏染色检查和氧化酶试验，应为氧化酶阴性的革兰氏阴性杆菌。生化反应不符合的菌株，即使能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集，仍不得判定为志贺氏菌属的培养物。　　已判定为志贺氏菌属的培养物，应进一步做 　　5%乳糖发酵 　　甘露醇 　　棉子糖 　　甘油的发酵 　　靛基质试验 　　志贺氏菌属4个生化群的培养物，应符合该群的生化特性。但福氏6型的生化特性与A群或C群相似。　 　　附：志贺氏菌属四个群的生化特性　　 五、结果报告：综合生化和血清学的试验结果判定菌型并作出报告。 编 ?? 发布日期：2010-05-13??浏览次数：2610 核心提示：　　试验方法：以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物，穿刺接种并涂布于斜面，置36±1℃培养18~24h，观察结果。　　三 　　试验方法：以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物，穿刺接种并涂布于斜面，置36±1℃培养18~24h，观察结果。 　　三糖铁琼脂(TSI)成分：　　蛋白胨 20.0g　　牛肉膏　3.0g　　乳 糖 10.0g　　蔗　糖 10.0g　　葡萄糖　1.0g 　　硫酸亚铁铵(含6个结晶水) 0.5g　　酚　红 0.025g或5g/L溶液5mL　　氯化钠　　　　　　　　　　5.0g 　　硫代硫酸钠　　　　　　　　0.5g　　琼　脂 12.0g　　蒸馏水 1000.0mL 　　除酚红和琼脂外,将其他成分加入400mL蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10min,加热煮沸至完全溶解,调至pH7.4±0.1。另将琼脂加入600mL蒸馏水中,搅拌均匀,静置约10min, 加热煮沸至完全溶解。　　将上述两溶液混合均匀后,再加入酚红指示剂,混匀,分装试管(12mm×100mm),每管约2～4mL,高压灭菌121℃ 10 min