中国部分地区猪流感病毒遗传演化分析.pdfVIP

猪的传染病一猪流感 中国部分地区猪流感病毒的遗传演化分析 于海周艳君李国新 闫丽萍陈宗艳童光志· (中国农业科学院上海兽医研究所猪病研究室上海200241) 摘要猪的呼吸道上皮细胞具有禽流感病毒和人流感病毒受体，具有感染禽流感和人流感病毒的能力，被认为是 新型流感病毒产生的“混合器”和古老流感病毒长期在猪体内存在的“贮存器”。近年来，为了更好防控猪流感，我们开 展了中国部分地区的猪流感流行病学调查。2006和2007年我们在广东省和浙江省的猪群中各分离到l株人源H1Nl 亚型和欧洲系禽源HlNl亚型sIv，并首次在中国进行相关报道；2007年我们从上海的猪群中分离到l株新型三源 化研究。所有这些研究使我们对我国sIv的分子进化有了全新的理解，为猪流感疫情监测及预防控制提供理论依据。 关键词 H1Nl亚型SⅣ；HlN2亚型SⅣ；H3N2亚型SIV；H9N2亚型SⅣ；遗传演化 innuenza vinls，SIV)引起的猪的一种急 猪流感(Swineinnuenza，SI)是由猪流感病毒(Swine 性、传染性呼吸道疾病。虽然SⅣ引起的死亡率很低，病猪也可迅速恢复，但会导致猪增重受阻， 肉料比降低，生产性能下降，对养猪业造成极大的损失。另外，猪的种间屏障相对较低，是禽、猪、 人流感病毒共同的易感宿主，是流感病毒新流行毒株产生的“混合器”…和古老流感病毒长期在猪体内 存在的“贮存器”。 进入二十世纪，人类经历过四次流感大流行，即1918年的西班牙流感、1957年的亚洲流感、 1968年的香港流感和1977年的俄国流感。每次流感大流行都给人类带来了巨大的灾难，并且都可 能与SI保持着千丝万缕的联系。近日，全球范围内爆发了大规模H1Nl亚型SIV病毒感染人并导致 人死亡的事件，给全世界人们带来了恐慌，更是给人们敲响了警钟，第一次确切地表明了SIV具备 感染人并在人群中传播的能力。因此，猪流感的影响不仅在于其显而易见的兽医传染病学的意义， 更在于其深远的公共卫生意义。 SI的发生和流行已有近百年的历史，欧、美、亚、非、澳洲等世界各地均有该病的发生和报道。 国部分地区猪流感病毒的分子流行病学调查，现将分离到的各种亚型SIV的分子遗传演化分析报告 如下。 l材料和方法 1．1毒株 2005～2007年，我们进行了黑龙江、河南、山东、浙江、安徽、江西、广东、北京、上海等省 H9N2亚型4株。 1．2试剂 1’aq聚合酶、PMDl8一T载体和限制性 QiagenRNAeasy删RNA提取试剂盒购自Qiagen公司、LA 内切酶购自大连宝生物公司、Biosp佃胶回收试剂盒购自博日生物技术有限公司。 1．3病毒增殖 采集病料，无菌研磨，收集浸出物，或者将鼻拭子浸泡于生理盐水中，2000～3000叩m离心10“n， 保留上清夜，尿囊腔或尿囊腔和羊膜腔双腔接种9～10日龄SPF鸡胚，37℃孵育，收集24～48h自 然死亡或未死亡鸡胚尿囊腔液。 1．4 RT-PCR 用QiagenRNAe鼬严IⅢA提取试剂盒提取病毒基因组lⅢA，反转录合成cDNA。然后以合成 6lO 第十三次学术研讨会会议论文集 的cDNA为模板，用针对SⅣ基因组的8对引物，进行PCR扩增。 15PCR产物回收、克隆及测序 用Biospin胶回收试剂盒回收相应的片段，回收片段与PMDl8一T连接，转化，筛选阳性克隆。 最后将阳性菌液送上海英骏生物技术有限公司测序。 1．6序列拼接及分析 氨基酸序列的同源百分率、绘制进化发育树。 2结果 2．1 人源HlNl亚型Srv的遗传演化分析 次中国的首次报道【2】。从HA和NA基因的系统进化树上可以看出，在中国所有的HlNl亚型sIv大致 可以分为三个谱系，即古典猪谱系、禽源谱系和人源谱系(图1)。我们的分离株 一致。 图1人源HlNl亚型SⅣ的HA和NA基因进化树 2．2禽源HlNl亚型SⅣ的遗传演化分析 从HA和NA基因的系统进化树上我们可以看出，我们的分离株起源于在欧洲流行的禽源HlNl亚型 SⅣ，暗含欧洲系禽源HlNl亚型SIV已经传播至中