银杏内酯B衍生物抗血小板聚集作用与作用机制研究.pdfVIP

银杏内酯B衍生物抗血小板聚集作用和作用机制研究 许惠琴1刘成鼎1韦敏1毛黎顺2 1南京中医药大学药理教研室2100462江苏柯菲平医药有限公司 210016 血栓形成和血栓栓塞性疾病与血小板活化因子PAF直接相关，它是迄今发现的最强的血 小板聚集诱导剂u3。研究表明GB是血小板活化因子特异性受体拮抗剂比卜，然而GB水溶性 极小，临床使用受限。通过研究其构效关系，在母核上增加新的基团，合成了衍生物(xQ)， 增加了水溶性。本实验采用非放射配基(PAF)与放射配基(例PAF)竞争PAF受体结合位点， 探讨XQ抗血小板聚集的作用机制。 1材料与方法 1．1材料 1．1．1药物与主要试剂银杏内酯B衍生物(xo)，白色结晶(纯度98％，分子量为 591．639／m01)，由南京柯菲平医药科技有限责任公司提供，用生理盐水配制：银杏内酯B (GB)，白色结晶(分子量为424．4 g／m01)，购自合肥标品生物技术有限公司，用二甲基亚 含492，5一二苯基恶唑(PP0)，400rag1，4一双-[5-苯基恶唑基一2]苯(POPOP)；玻璃滤膜 膜片，whatman公司。其余试剂均为国产AR级。 1．1．2动物雄性新西兰家兔，由南京江宁县汤山青龙山动物繁殖场提供，实验动物生产许 可证： SCXK(苏)2002—0027。 世帝科学仪器公司)；zT—IⅡ多头细胞样品收集器(上海跃进医疗器械厂)；美国Wallac GUARDIAN Elmer公司)。 1414液体闪烁计数仪(perkin 1．2实验方法 1．2．1 XQ对PAF诱导家兔血小板聚集的影响DJ洲 取雄性家兔48只，体重2．0-2．5kg，随机分为6组：①对照组：0．9％氯化钠注射 I组：1．95 II组： 液；②曲克芦丁组：24mg／kg；③GB组：3．90mg／kg；④xQmg／kg；⑤XQ 3．90 药15min后颈总动脉取血，用3．8％柠檬酸钠抗凝，血液与柠檬酸钠容积之比为9：1。800rpm l IIl 先用250|lPPP进行定标，然后取250PRP加入测试杯中，在37。C预温槽中预热imin PAFIOp 后放入测试孔，按“开始”键时立即加入诱导剂0．01mg／ml 1，测定最大聚集率， 每只家兔同时测定4个测试孔取均值。用公式计算血小板聚集抑制率№1。 355 1．2．2 XQ对PAF受体的特异性拮抗作用∞’7’羽 1．2．2．1洗涤血小板的制备 从家兔颈动脉取血，以十分之一体积的酸性枸橼酸盐一葡萄 糖溶液(ACD液)抗凝，1000rpm离心10rain，取上层富血小板血浆(PRP)，加等体积的磷 酸盐缓冲液(PBS)洗涤3次(3300rpm离心5min)，在显微镜下进行血小板计数，取沉淀 血小板加入含0．9mmol／LCaCl。和0．I％BSA的PBS液，稀释成浓度为0．5x108几血小板悬浮 液。 u 1．2．2．2非特异性结合中非标记配基(冷药)浓度的选择每反应孔加701血小板悬液， 102、7．38×102、 加10弘1不同浓度的PAF液(终浓度为7．38×10一、7．38、7．38×101、3．69X Il 3．69×103nmol／L)，每个浓度3份，25℃振荡混匀lOmin。然后加入101[蜘PAF液(浓 度为4．05×10一。retool·L-1)，加生理盐水至100u1。25℃振荡反应lOmin后，用含I％BSA的 冷生理盐水终止反应，真空抽滤，用2ml同样溶液冲洗滤膜12次，取下滤纸片，红外灯下 烘干，置2ml二甲苯闪烁液中，测量B。；的放射性强度(CPM)。以未标记PAF浓度的对数值 与B。。放射性强度作LogCPAr风曲线图。随着非