配制MS培养基母液。.pptVIP

项目三 培养基（Medium）是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料，一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）以及维生素和水等。有的培养基还含有抗菌素和色素。 按所用原料不同，可分为两类：应用肉汤、马铃薯汁等天然成分配制的，称为天然培养基； 应用化学药品配成并标明成分的，称为合成培养基或综合培养基。 1、大量元素 原则上可以混在一起，但硫酸镁与氯化钙要单独配制，因为高浓度的Ca2+与Mg2+与磷酸盐混合，会产生不溶性沉淀。 配制方法：用天平称取药品，分别加入600-700ml蒸馏水中，再用磁力搅拌器搅拌，待第一种药品溶解，加入第二种药品，最后定溶。或每一种药品分别溶解，然后混合，最后定溶。 5、激素母液 必需单独配制，储存于冰箱。 一般浓度为0.5-1mg/ml。 IAA、NAA、IBA、2，4-D等，可先用0.1mol/L的NaOH或95%的酒精溶解，然后定溶。 KT、BA等细胞分裂素应先溶于少量0.1mol/L的HCl，然后定溶。 （2）微量元素母液（100X）：称10升量溶解在100ml水中。配1升培养基取10ml （3）铁盐母液（100X）：称10升量溶解在100ml水中。配1升培养基取10ml。 （4）维生素母液（100X）：称10升量溶解在100ml水中。配1升培养基取10ml 配制倍数不宜过高，可避免浪费；也可避免倍数过高，吸取量相对少而影响准确性。 母液配制好后应放在2～4℃冰箱内保存。 母液贮备时间不宜过长。过长时宜出现沉淀和微生物污染。 配制方法： 1、将母液按顺序摆放 2、取适量的蒸馏水(所需培养基量的2/3)入容器 3、按需要量依次取母液（吸取量=配制浓度 × 体积 / 母液浓度）及生长调节物质 4、加入蔗糖(30g/L)溶解 5、加琼脂(6-10g/L)，煮沸，2-3min 6、定容 7、调PH值(pH=5.8) 8、分装培养瓶，封口 9、高压灭菌 过滤灭（除）菌（不耐热的物质 ） 一、培养基成分： 1、无机营养：大量元素 微量元素 铁盐 2、有机营养成分：有机附加物 氨基酸 维生素 肌醇 糖类 3、植物生长调节物质： 生长素 细胞分裂素等 4、琼脂 5、活性炭 6、pH 7、水 椰乳（CM） 8、天然物质： 酵母提取物（ME） 麦芽提取物（YE） 1、无机营养元素(inorganic element) 1)大量元素：指浓度大于0.5mmol／L的元素。 [C、H、O、N、P、K、Mg、S和Ca]。 在细胞里主要是以各种辅酶的形式参与多种代谢活动对离体组织的生长具有明显的促进作用，主要为B族维生素 。 种类： VBl(盐酸硫胺素)、 VB3（泛酸）、 VB6(盐酸吡哆醇)、 Vpp(烟酸) Vc（抗坏血酸）、 VH(生物素) VB11(叶酸)、 VB12（钴胺素)等。 使用浓度： 一般用量为0.1-1.0mg／L。 又叫环己六醇，在糖类的相互转化中起重要作用。 使用浓度：一般为lOOmg／L。 作用：适当使用肌醇，能促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽的形成。对组织和细胞的繁殖、分化有促进作用，对细胞壁的形成也有作用。 作用：蛋白质的组成部分，也是一种有机氮化合物。是很好的有机氮源，可直接被细胞吸收利用。 种类：最常用的是甘氨酸，其他的如精氨酸、谷氨酸，谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等半胱氨酸及多种氨基酸的混合物（水解酪蛋白、水解乳蛋白）等。 使用浓度：为10-200mg／L。 当有机氮为唯一氮源时，离体组织生长不良，只有在无机氮存在的条件下，才能取得理想的效果，它的主要