6、鸡新城疫的诊断.pdfVIP

实验六、鸡新城疫的诊断 实验六、鸡新城疫的诊断 实验六、鸡新城疫的诊断 王晓泉 刘慧谋 高架上 养鸡的 肉鸡场 工厂化笼 养蛋鸡场 一．实验目的 二．实验原理 三．实验材料 四．实验步骤和方法 一、实验目的 掌握新城疫的临诊诊断要点 掌握鸡新城疫的诊断和免疫监测技术 三、实验材料 9-10日龄SPF鸡胚、96孔V型微量反应板、 微量振荡器、病毒材料、红细胞悬液、生理 盐水或PBS、微量移液器、注射器、抗凝剂、 离心机、恒温箱、孵化箱、照蛋器等。 新城疫病毒分离和鉴定的一般程序 临床样品的收集 样品处理 快速鉴定（RT-PCR） 接种 实验动物 细胞 鸡胚 R 验 试 斑 空 标 酶 光 荧 H 观察发病 收获尿囊液、 T- A、 羊膜腔液 P C H I Koch’s法则 R HA、HI和RT-PCR 致病指数：MDT、ICPI、IVPI 四、实验步骤和方法  鸡新城疫病毒的分离  鸡新城疫病毒的鉴定 新城疫病毒的分离 样品采集、运送和保存 样品处理 病毒分离培养 样品采集、运送和保存  1、样品的采集  A采样部位 脑、肝、喉气管、脾或其他病变典型的部位， 泄殖腔拭子和咽拭子。  2、样品的运送和保存  病毒的抵抗力通常较弱，在室温下很快灭活，样品采集后应 立即送到病毒实验室，如实验室距离较远或一时无法立即传 送时，应将样品放入装有冰块的冰壶内尽快送检。  最好在样品采取后1~2h内送到实验室，立即进行检查或分离 培养。暂时不能检查或分离培养时，应将样品存放在-20℃ 低温冰箱内保存。 样品处理 A将脑、肝、喉气管、脾等组织取适量混合 研磨，用含抗生素（青、链霉素2000U/ML ） 的PBS制成1：5悬液。  B泄殖腔拭子和咽拭子。将拭子样品浸于含 抗生素（青、链霉素10000U/ML）的PBS中 C上述样品冻融3次，组织悬液或拭子浸液 2000r/minx15min离心，取上清为接种材料。 病毒分离培养  鸡胚接种  A 接种：每份上清接种5个9-10 日龄SPF或非免疫 鸡胚，尿囊腔接种每胚0.2ml。  B 照蛋：接种后鸡胚37℃继续孵化，定期照蛋。取 接种后24-120h 内死亡的胚或垂死胚、120h内活胚 置4 ℃冷却4-24h 。  C收获尿囊液：无菌取尿囊液，做HA试验，如为阳 性用已知抗NDV血清做HI试验，如为阴性再盲传两 代。 鸡胚接种图示 尿囊腔接种