常见的细胞培养问题.pdfVIP

常見的細胞培養問題 整理 : 洪啟仁/生資中心副研究員 1.解凍後觀察 : 1-1鏡檢 (Microscopic) 可能引起的原因 解決方式 1.解凍後若以離心方式去除 1. 考慮直接將解凍後的細胞懸 1-1-1 DMSO ，部分細胞未有效沈 浮液加入含新鮮培養基中直 細 澱，細胞數將會減少。 接培養，細胞貼附後，第二天 胞 再更換培養基。 數 2. 有些細胞容易絮聚而沈積在 2. 細胞解凍後 pipetting 5 至 7 少 冷凍管底部，若吸取細胞懸浮 次 ，混合均勻。 液前沒有充分混合均勻，則可 能只吸到細胞數較少的上清 液。 1-1-2-1 有些細胞本身冷凍後存活率不 解凍後先培養在 T25 flask 。 佳或細胞數較少。 1-1-2-2 解凍後受 DMSO 毒害: 1-1-2 存 1. 細胞對 DMSO的毒性較為敏 1.解凍後的細胞必須立刻經由 活 感，例如 :HL-60細胞。 離心方式去除DMSO 。 率 2. 細胞解凍後，細胞懸浮液在冷 2. 先將所有實驗材料準備齊 不 凍管內時間拖太久。 全，培養基預熱好再進行解 佳 凍。 3. 至少加入 10ml 以上的新鮮培 3. 解凍後的細胞懸浮液種至 養基或使 DMSO 濃度在 1 % (seeding)含新鮮培養基的 flask 內，但由於培養基量太 以下。 少而不足以稀釋 DMSO的毒 性。 1-1-2-3 解凍前後受溫度變化之傷害 : 1. 收到細胞後最好是儘速解凍 1. 收到本所寄出的細胞後沒有 培養或暫存於-80℃冰箱，並於 馬上解凍培養或是暫存在 -80 翌日轉移到液氮筒內。若暫存 ℃冰箱的時間太久。 1 於 -80 ℃冰箱時，時間不宜太 久，以 1-2 天為宜。 2. 從液氮筒將冷凍管取出至解 2. 以乾冰或液氮暫存筒移送。