利用细菌人工染色体文库(BAC)筛选猪乳蛋白基因.pdfVIP

维普资讯 畜牧兽医学报 ，2001，32(2)，97100 ActaVeterinaria etZootechnicaSinica 利用细菌人工染色体文库 (BAC) 筛选猪乳蛋 白基 因 赵兴波。，铃木恒平。，李 宁 ，吴常信 (1．中国农业大学动物科技学院 ，北京 100094； 2．日本农林水产先端技术研究所动物基因组研究部 。Tsukuba，lbaraki．305 3．中国农业大学农业生物技术国家重点实验室 ，北京 100094) 摘 要 ：利用猪细菌人工染色体文库 (porcineBact Artificialc】1r：眦 姗 一e．pBAC)的两步一 四维 P(_3t(twostep-4一DPCR方法筛选猪乳清酸性蛋 白(WheyAcidicProtein，WAP)． 醅蛋 白，as2一醅 蛋 白， 醅蛋白，醅蛋白的基因 pBAC克隆，并提 出了BAC基因文库一步一五维 PCR(onestep-5一D PCR)筛选基 因的方法。 关蕾词 ：猪乳蛋白基因；猪细菌人工染色体 ；两步一 四维 PCR筛选法；一步一五维 PCR筛选法 中囤分类号 ：s8133 文献标识码 ：A 文章编号 ：0366—6964(2001)02—0097—04 细菌人工染色体文库 (BacteriaArtificialChromosome，BAC)是继酵母人工染 色体 文库 (YeastAr tificialChDDmctsorl2e，YAc)之后构建的基因组文库，在人和动物基 因组计划的研究 中，已成功地构建了人l1、猪一2、牛_3J、山羊 43和小鼠的BAC文库 。 在猪的基因组计划 (PigMap)研究 中，目前已构建 的基 因文库有细菌人 工染色体文库 (porcineBacteriaArtificialChrolnosorD．e，pBAC) 和酵母 人 工染 色体 文库 (YeastArtificial Chromc~ome，YAc)～ 。本研究使用的 日本农林水产先端技术研究所动物基因组研究部建立 的细菌人工染色体文库是从大白×长白×杜洛克杂交公猪的肾脏提取的DNA构建的基 因组 文库 ，该基因组文库共有 103488个克隆 ，插入基 因组片段范围为 70kb～190kb，平均插入的基 因组片段为 130kb，约覆盖猪全部基因组 4．4～4．7倍。 pBAC文库有保存文库和工作文库，保存文库为细菌形式依照一定的顺序保存的 pBAC 克隆，用于保存 BAC文库；工作文库为保存文库 的克隆经提取 DNA后按照两步一四维 PCR 基因筛选法混合 pBAC克隆的DNA构成 的pBAC文库 ，用于筛选基 因l1-。该 pBAC工作文库 包括 22个 superpool，每个 superpool由49个 96孔的盘 (plate)组成 ，孔 内即装人 pBAC克隆的 DNA混合样品。筛选基因时，49个盘可看作每 7个盘为一组 (set)，这样一个 superpool共有 7 组 ，即一维 (1一D)，每一组又由7个盘组成，即二维 (2一D)，由于每个 96孔 的盘为 12×8的组成 形式 ，因此构成 了BAC基因文库两步一 四维 PCR基因筛选法的三维 (3一D)和四维 (4一D)。通 过pBAC基因文库两步一四维 PCR筛选法筛选后 即可确定待选基 因的BAC克隆，从pBAC保 存文库中找出该克隆用于基 因定位及结构一功能的研究。本研究使用 pBAC基因文库两步一 收藕 日期 ：19994)922 基盒项 目：国家重点基础研究规划项 目(G2OO00161)和 日本农林农产先蜡技术研究N (STAFF)~ 基因组研究部特别振兴 事业资助。 作者简介：赵兴被 (1969～)．男 ．辽宁洗阳人 ．副教授 ，博士，从事动物分子遗传学研究。 维普资讯 畜 牧 兽 医 学 报 32卷 四维PCR筛选法 ，通过猪 的序列设计 引物筛选猪乳清 酸性蛋 白(WheyAcidicProtein， WAP)E ，sL酪蛋白，s2一酪