原核表达系统真核化中的核定位信号对乙肝病毒(HBV)基因免疫效果的影响.pdfVIP

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 ’() *! 1( *# 年 月 $%% $ !#$ %’()(*(+$ ,-$ +,-,./,0 $%% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 原核表达系统真核化中的核定位信号对 乙肝病毒（ ）基因免疫效果的影响 !# $ $ 李永念 熊思东 袁志刚 （贵阳医学院免疫学教研室 贵阳 88%%%! ） $ （复旦大学上海医学院免疫学系 上海 $%%%$ ） 摘 要：研究核定位信号对真核化的 表达系统在真核细胞及基因免疫中表达 基因 59 I4JB 效率的影响。结果发现，在体外培养细胞中，无核定位信号的59 系统表达效率比有核定位信 号组明显要高。基因免疫时，无核定位信号组诱发小鼠产生了针对 I4JB 的特异性免疫应 答，而含核定位信号的 表达系统则未能诱发小鼠发生明显的免疫应答。提示 系统是一 59 59 种胞浆表达系统，将59K1J 聚合酶引入核定位信号后该系统的表达效率降低，甚至不能诱发 特异性免疫应答。 关键词：核定位信号， 表达系统，乙肝病毒，基因免疫 59 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） L96 J %%%7#$%: $%% %#7%9$67%! 表达系统是基因工程的关键，也是影响基因免疫效果的重要因素。基于59 K1J 聚 合酶与 强启动子（ ）间的特异性识别而建立起来的 聚合酶 启动子偶联表达 59 % 59 K1J M ! 系统（简称59 系统）在大肠杆菌中已取得了令人满意的结果，是目前所知表达效率很高的 原核表达系统之一。如何将该系统引入真核细胞表达外源基因是近年来的研究热点。最 ［ ］ 近，该系统已陆续在酵母、昆虫、植物和哺乳动物细胞中实现了高效表达 N ，为研究异种 蛋白在哺乳动物细胞中的表达、基因疫苗的研制及基因治疗提供了有力工具。迄今，对 59 系统的改造多未引入核定位信号，也实现了目的基因的表达。这是否提示该系统在真 核细胞中表达外源基因无需核定位信号，转录和翻译无需在核内进行？核定位信号是否 对其表达效率有影响，进而影响基因免疫的效果呢？为了回答此问题，我们进行了以下实 验研究。 $ 材料和方法 $% $ 主要材料 OJK$ 质粒（含有 59K1J 聚合酶基因及来源于 P’!% 5 抗原的核定位信号）、 OJK$# 质粒（只有59K1J 聚合酶基因而无来源于P’!% 5 抗原的核定位信号）和OJ’Q 基金项目：美国中华医学基金会（ ）资助 234 通讯作者。 ： ； ： 5,) 6#7$78!$99!: ;7.=) ?@=(AB