雏鹅新型病毒性肠炎弱毒株的培育及特性的研究.pdfVIP

生垦童重量匿里垒查塞堂殳叁璺上选皇茎堡!±叁堡塞整 雏鹅新型病毒性肠炎弱毒株的培育及其特性研究 程安春汪铭书陈孝跃 (四川农业大学动物科技学院四川省动物生物技术重点实验室，四川，雅安，625014) 摘要本文报道丁雏鹅新型病毒性肠炎弱毒的培育及其特性研究结果。应用在鸭胚成纤维细瞻上连续传代的 易感1日龄雏鹅连传8代不返强=该弱毒具有良好的免疫原性．最小免疫剂量为10000个TcID…免疫后3天产生 部分免疫力，5无产生坚强免疫力。口服免疫效果最好，对雏鹅免疫期在30天阱上。该弱毒株能够干扰强毒在雏鹅 体内繁殖+进凡鹅俸后能够进行一定程度繁殖并排泄出体外，使同居雏鹅感染并获得一定程度免疫力。临床使用后 可以及其显著地降低雏鹅的死亡率。 、关t词雏鹅新型病毒性晡炎病毒弱毒 培育特侄I ^ 雏鹅新型病毒性肠炎是主要发生于30日龄以内的雏鹅的一种以小肠出血性、纤维紊性渗出性 一坏死性炎症为特征的传染病“1，其病原初步被认定为一种雏鹅新的腺病毒o“3。对该病进行了有关 流行病学调查、病理变化观察、病原特性、病原精细结构及病毒结构蛋白多肽分析、病毒的核酸型及 核酸链型、人工感染病例的病理形态学发展规律研究、病毒的形态发生学及人工感染病例的组织结 构超微变化等一序列研究，对该病有了一定程度的认识。为了能够提供有关该病预防的有效制剂t 本研究开展了雏鹅新型病毒性肠炎弱毒株的培育并对弱毒株的特性进行了详细的研究。实验室初 步实验结果表明，实现了预期的构想，现报道如下。 l材料和方法 1．I NGvEv—cN株由NGVE自然病例分离和鉴定．对鸭胚成纤维细胞的半数细胞感染量 TcID；。一10。5／o．2m1；对1日龄雏鹅的半数致死量LD；。一10。／o．2m1． 1．2 1日龄四川白鹅本研究所使用的1日龄四川白鹅，其上一代母鹅在产蛋前以间隔1周的时 问用小鹅瘟弱毒疫苗一共免疫3次，在收集种蛋时母鹅血清中抗小鹅瘟琼扩效价≥1：32，雏鹅孵 出当天用兔抗小鹅瘟高免血清(每毫升能够中和15000个鹅胚半数致死量的GPV)1m1。其上一代 母鹅经Dot—IGss方法o：，抗NGVEV抗体阴性。 1．3原代鸭胚成纤维细胞(以下简称细胞)选择健康活跃的lo日龄天府肉鸭鸭胚，参照文献“1 制备。 1．4 NGvEcN株在细胞上的繁殖和传代将NGvE—cN株o．2ml接种于长满单层细胞，37℃ 吸附60分钟，倾弃病毒液后加维持液于37℃继续培养，致细胞出现75％病变时收获、冻存，即为 Fl代，……继续传至F40代。 5、F20、F25、F30、F35、F40 分组，20只／组，共lo组。第l、2，……9组每只分别口服F1、F5、F10、F1 细胞毒o．5ml，第lo组每只口服生理盐水o．5ml作为对照。相互间隔离饲养，观察60天，详细记 录。 NGvE 1．6 cN株F40代(以后简称cN40株)特性测定： 1 99— 主里查笪量匿兰鱼苎堑芏坌塞蔓±选芏垄煎过童堂皇塞 l_6．1对细胞的半数感染量(TcID。。)的测定参照文献“1进行。将40株用Hanks液作连续10 5天，记录病变发生情况，按Reed— 倍稀释，即10_1～10。。．每个稀释度接种10管细咆，观察1 5。o Muench法计算TcID 1．6．2对1日龄雏鹅安全性实验1日龄健康活泼的四川白鹅240只，随机分组，40只／组，共6 组。第1、2、3、4、5组将cN40株原液通过口服、口服、皮下注射、肌肉注射、滴鼻、静脉注射o．5m1， 第六组每只口服o．jml生理盐水作为对照。相互间隔离饲养，第l组于接种后2～10天每天宰杀1 只、11～60天每隔3天宰杀1只，剖解并用肉眼仔细观察各个器官组织的变化；第2～6组饲养观 察60天，详细记录。 l_6．3弱毒性能的稳定性(即返强)实验第一代返强用1日龄四川白鹅40只．每只口服cN40 株o．5ml，隔离饲养观察60天，并于5、10、15、20、25日龄每次宰杀两只，仔细观察各个器官组织的 变化；并取5日龄剖杀的肝