细菌内毒素国家标准品原料的制备及其理化性质和生物学活性的分析_于婷.pdfVIP

细菌内毒素国家标准品原料的制备及其理化性质和生物学活性的分析 于婷 ,蔡彤 ,张国来 ,高华 ,李波 (中国药品生物制品检定所 ,北京 100050) 摘要 : 目的　制备第 7批细菌内毒素国家标准品的原料 。方法 　常规方法培养和收获细菌 ,超声破碎菌液 ,热酚水法制备内毒 ( ) 素粗品 ,充分透析去酚后 ,浓缩 ,取上清 ,超速离心 4 ℃, 105 000 ×g , 4 h ,最后冻干 。采用该方法共制备得到 3批内毒素原料 候选品 ,对其进行理化分析和生物学活性测定后 ,确定其中一批作为内毒素国家标准品原料 。同时与细菌内毒素国际标准 ( ) 品、中国细菌内毒素国家标准品 N S, Lot: 981 和 日本细菌内毒素国家标准品进行一系列比较 。结果 　3 批原料候选品中 , 3 号内毒素原料的生物学活性最好 ,杂质含量最低 。结论 　3批内毒素原料的生物学活性以及理化性质基本一致 ,表明采用的 提取方法稳定 、重现性好 。通过生物学活性和杂质含量的比较 ,结果表明 , 3号内毒素原料可以作为制备新一批细菌内毒素国 家标准品的原料 。 关键词 : 内毒素 ;细菌内毒素国家标准品;热酚水法 中图分类号 : R9 17　　　文献标识码 : A 　　　文章编号 : 100 1 - 2494 (20 10) 05 - 0388 - 04 Prepara tion an d Propertie s of Bacter ia l Endotox in Na tiona l Standard M a ter ia l YU Ting, CA I Tong, ZHAN G Guolai, GAO Hua, L I Bo (N a tiona l Ins titu te f or the Con trol of P ha rm aceu tica l and B iolog ica l P roducts, B eij ing 100050, Ch ina) th A BSTRACT :O BJECT IVE　To p rep are the 7 bacterial endotoxin national standard m aterialM ETHOD S　E scherich ia co li O 11B4 was cu ltu red and harve sted by rou tine m ethod, bacterial liqu id wa s b roken by sup ersound, then crude endotoxin m aterial was extracted by hot phenolwater. A fter sufficien t dialysis to remove all trace s of p heno l, endotoxin was concen trated The sup ernatan t was cho sen and pu rified by u ltracentrifge at 105 000 ×g at 4 ℃ for 4 h F inally the sedim ent wa s freezedried Three batches of endotoxin m aterial candidate were p rep ared by th is m ethod, and one of the batches was ascertained to be bacterial endotoxin national standard m aterial by p hysical chem ical and b io logical activity assay A serie s of comp arison were carried ou t between bacterial endotoxin in ternational stand ard, national standard ( the