高血压病血瘀证血管内皮损伤内质网应激细胞凋亡机制研究.pdfVIP

第九次全国中西医结合血瘀证及活血化瘀研究学术大会 应。TNFa还是一类作用广泛的促炎症细胞因子，在动脉粥样硬化中的作用是：①诱导血小板黏附，增 强白细胞的趋化作用和血管细胞增殖迁移。②直接损伤内皮细胞，使脂质沉积形成动脉粥样硬化斑块。 ③介导MHC抗原的表达和基质沉积等血管炎症反应。④诱导Clip合成。 本实验中，经过造模前四周及造模后30天至60天的高脂喂养，实验兔出现肥胖，高脂血症、高胰岛素 血症，显微镜下可见血管内膜增厚。从动物早期Rs模型标本发现[6]：(1)术后第一月内形成动脉内壁除亚 血栓，炎症反应病灶多见，病灶中可见大量组织细胞、淋巴细胞、嗜中性粒细胞及肉芽组织等。(2)炎症反 应程度与动脉受损伤程度正相关。(3)新生内膜厚度与损伤程度正相关。(4)新生内膜厚度与炎症反应程 度正相关。(5)损伤与炎症共同作用会更大程度导致内膜增厚，且内膜增生越厚，新生内膜面积越大，Rs率 越高。在血管HE切片上可见，模型组病灶区血管内膜厚度明显大于相邻部位非病灶区，可见手术对兔血 管内膜损伤的造模是成功的。药物组的血管内膜增生程度低于模型组，且中浓度组内膜增生程度最低， 显示出药物对炎症反应的抑制作用。从30天，和60天两批模型来看，在持续灌药30天后便可达到稳定的 药物浓度，并在60天后，对各项指标仍能保持良好的控制效果，显示出较好的中远期疗效。 高血压病血瘀证血管内皮损伤的内质网应激细胞凋亡机制研究 孙喜稳1 陈利国2 王华强1屈援3颜亮4唐海兰5李咿 (广州，510632)；6．广东暨南大学(广州，510632) 血瘀证是许多疾病常见的共同病理变化，对于疾病的发展和转归具有重要的影响。近年来，人们发 现血瘀证的形成、发展、演变与血管内皮细胞损伤有着密切的关系。血瘀证发生时，血管内皮细胞表现 出内分泌、通透性、抗氧化损伤、对凝血和纤溶系统的影响等方面的功能发生障碍；活血化瘀药物能够 多环节、多渠道地显著改善血管内皮细胞的功能。因此，血瘀证与血管内皮功能障碍相关性的研究，成 为中西医结合学界研究的一个热点。 内质网是真核细胞重要的细胞器，是调控细胞内膜型和分泌型蛋白质合成、钙稳态和细胞凋亡的重 要细胞器。多种刺激因素能够诱导内质网内未折叠或错误折叠蛋白质的聚集和钙稳态失衡等内质网应激 状态，内质网应激在维持细胞生存和细胞凋亡的平衡中有重要作用。适度的内质网应激通过激活未折叠 342 第九次全国中西医结合血瘀证及活血化瘀研究学术大会 蛋白反应促进内质网紊乱的恢复，但持续严重的内质网应激会触发内质网相关凋亡途径，内质网应激相 关的细胞凋亡参与了多种疾病的发生。血管内皮细胞具有高度发达的内质网，对内质网应激非常敏感。 通过诱导细胞凋亡导致内皮细胞发生功能障碍，这与糖尿病、动脉粥样硬化、冠心病等心脑血管系统疾 病的发生、发展关系密切。因此，血管内皮细胞内质网应激相关的细胞凋亡越来越受到研究者的重视。 属于内质网应激的分子伴侣家族，26S蛋白酶体与内质网应激时未折叠蛋白的降解有关，而GNB2L1已被证 实与内质网应激未折叠蛋白反应的启动子IREl有着密切的关系。因此，本研究通过观察高血压病血瘀证 患者血清致伤内皮细胞后与内质网应激蛋白JN}(、CHOP相关的细胞凋亡，探讨高血压病血瘀证血管内皮损 伤的机理，期望能够揭示血瘀证的病理实质和活血化瘀药物治疗高血压病的作用机理。 1材料与方法 1．1主要试剂与仪器 Doxorubicin(浙江海正药业股份有限公司)；Annexin 巯基乙醇，甲叉双丙烯酰胺，Tween-20，考马斯亮蓝，二硫叔糖醇，溴酚蓝，甘油，甘氨酸，甲醇，脱 blotting 装置(Bio-rad公司)：流式细胞仪(BD公司)。 2实验方法与步骤 2．1Western blotting检测I肛l、PERK、ATF6的表达 实验分组 组别 条件培养基的组成 A对照组 10％健康人血清+90％F12K B非血瘀证组 10％高血压病非血瘀证患者血清+90％F12K C血瘀证组 10％高血压病血瘀证患者血清+90％F12K 人脐静脉内皮细胞的干预 入无血清培养基同步化24h：将