干扰素α1b突变体的构建和生物学活性研究.pdfVIP

的抑制作用较IFN啦为弱。500单位／mlIFNnI对骨髓瘤细胞U266作刚72小时可诱导细 U266细胞2小时 胞凋亡，其作用机制可能是由于凋亡相关基冈的上调控。lFN{zi作_I{j 即诱生表达这种基因，并与剂量相关。为进一步评价对基因转录的作J{j，单核细胞经 类HLA的增加作用与IFN啦相似。 IFN处理后测定类HLA表达的情况，IFNal对 似，但在非造血细胞中对STATI同种二聚体的诱生则比其他IFN为少，但在Daudi淋 巴瘤细胞或周围血单核细胞则未有此种差别。冈此IFNa．对一些细胞作用的不同可在信 号传导反映出来。 参考文献 CostsAnnalsofInternal 1．Borden，E．C．Parkinson，D．Interferons：Effectiveness，Toxities，and Med．1996．V．125(7)：614． and of Research recombinant J．Interferon 2．Kuitang，Tong development interferonalb Research Cytokine 1997，17(s2)：63． 3、干扰素alb突变体的构建及生物学活性研究 陈仰权徐帆洪童蔡塘 (上海生物制品研究所，上海200052) l摘要】用PCR定点突变技术将重组干扰素IFNctlb第86位氨基酸的核苷酸密 码子TGC改变成GAT，即将半胱氨酸变成天冬氨酸，得到IFNctlb的突变基因，并克 隆剑表达载体，实现突变体干扰素在人肠杆菌JMl09(DE3)中以包涵体形式高效表达， 在发酵培养中表达量可达10’IU／L，并对肿瘤细胞生长抑制作州有显并提高，促NK细 胞杀伤活性也有所提高。 【关键词l干扰素alb突变体，抗细胞增殖活性 重组人干扰素alb已在l临床实践中证明治疗多种病毒性疾病和某些恶性肿瘤有 效。探索抗肿瘤活性更高的干扰素，本文J_I=|PCR定点突变技术将IFNalb第86位、}胱 氨酸的密码子TGC改变成天冬氨酸的密码子GAT，并克隆剑pET一9a载体中，使此种 性进行研究。 材料与方法 GTATCGAATTTGTCTA一3’)扩增出IFNalb／86D后、F段基冈，然后，I=fJIFNalb／86D前、I- 全基冈与质粒载体pET-9a构建成重组质粒，将此质粒转化大肠杆凶JMl09(DE3)。 2．摇瓶培养；用两种浓度的IPTG(o．ImM、O．2mM)和三种浓度的乳糖(1mM、 t摇床转速250rpm， 2mM、4mM)分别诱导pETD／JMl09(DE3)工程菌，温度37 菌种接种量为5％，诱导时的oD60m。为0．5-0．7，诱导时间为5--6小时。 3．发酵培养：在5升发酵罐中用分批补料培养法。 4．突变体干扰素的抽提、复性和纯化：用7MGuHCI、1％6·ME抽提液溶解后， EDTA 8．0，ImM 8．0，3mMGSH-0．3mMGSSG，5％蔗糖) 用复性液(20mMTris-HCIpH pH S-100分子筛 直接稀释复性，复性干扰素再用S-SepharoseFF离子交换层析、Sephacryl 层析纯化。 5．干扰素活性测定：用WISH．VSV系统，并用国际标准品校正为国际单位(IU)。 b／86D，