和烟草丛枝病相关的低分子量RNA的研究.pdfVIP

与烟草丛枝病相关的低分子量RNA的研究 莫笑晗一 吴建宇、陈海如… (云南农业大学云南省植物痛理重点实验室，昆明650201) 0而健康 摄要在舌南省柏革丛枝病痛抹“织的怠植酸中．置现了与蛔革丛枝病相关的低分于量RNA 烟糠中无上速RNA．在非变性琼脂糖凝艘中，随旭革丛枝病分布地区不一，上述RNA时电泳迁移丰分 别相当于0．80kb和0．75kb的赶链DNA．虼化1来自保山艇桥沙孽的与■革丛技病抽·美的RNA．枝鼍 酶敏感性分析和在变性蒜腊糖凝腱中的电泳行为显示，与一革丛枝病相关的RNAlr健具有与卫星 RNA奏似的蛄构． 关■调烟革丛枝病RNA 烟草丛枝病是近年来在云南省部分烟区流行的一种毁灭性病害．其主要症状是患病烟株严重 矮化，缩顶，腋芽丛生，叶色淡绿，株型成为密生小叶的丛授形·早期患病的烟株不开花，晚期 患病可开花。作者在烟草丛枝病病株的总核酸中发现了与烟草丛枝病相关的低分子量RNA，并且 对其进行了初步定性。 1材料与方法 1．1材料来漂 烟草丛枝病标本采自云南省各地t六库丽昌、六库艳茂、保山辛街大管市、保山辛街小黎、保 山板桥沙登、保山坝湾、弥勒新哨、宾川大理经作所、云南农大农场、建水青龙、建水羊街农场、 弥勒弥东、楚雄东华。、 。 1．2 烟草组织总桉酸的提取 应用CTAB法，主要参照Ahrens和Seemiiller的方法进行。 1．3 且的桉酸的检测 1．3．1 EB)，0．5 琼脂糖凝胶电泳 参照萨姆布鲁克等的方法。1．2蛤辣脂糖凝胶(舍0．5Ug／ml XTBE为缓冲液，5V／cm电泳2．5小时。 1．3．2 聚丙烯酰胺凝胶电泳参照萨姆布鲁克等的方法。5％的非变性聚丙烯酰胺凝胶(Acr；Bis =19：1)，lXTBE为缓冲液，7．5mA／胶电泳14小时。参照卢圣栋等的方法进行银染色。 1．4 目的桉馥的纯化 参照萨姆布鲁克等的方法。5％的聚丙烯酰胺凝胶(Acr：Bis=19：1)，上样总核酸(来自保 小刀切下含有目。的条带的凝胶块，置离心管中，用玻璃棒将凝胶块压碎，加入1～2倍体积的洗脱 10分钟，吸出上清液。在离心管中再加入等体积的洗脱缓冲液，振荡5分钟后，6000r／分钟离心。 t 合并两次离心后的上清液，加入等体积的氯仿z异戊醇(241)抽提30分钟，6000r／分钟离心10 分钟。小心吸出上清液，加入1／lO体积的醋酸钠(3．omol／L，pH5．2)和2．5体积的无水乙醇， ·云南寄科委和云南省烟草公司联合费助重点硬日I**现在云南省婀草科学研究所工作；…项目负责及联摹人． 480 干燥。沉淀溶于适量灭菌水申，置于一20℃保存。通过1．2％的琼脂糖凝胶电泳检测所制各的核酸 的纯度，紫外分光光度法确定浓度。 1．5 目的棱奠对接酸奠的t感性分析 A，Sino—American 参照Srnit等及Zhou等的方法。应用2．5mg／ml的RNA酶A(RNase mol／L mol／L Co．)分别在高盐(o．3 NaCI)和低盐(o．03NaCI)溶液中于37℃温 Biotechnology RNase-- 浴60分钟，对纯化的目的核酸(约200ng)进行消化。应用10ttg／ml的DNA爱，(RQ一1 free DNase，Sino--American BiotechnologyCo．)在厂家指定的缓冲浪中于37℃捏浴60分钟，以