SNase+RC-末端缺失片段SNR135构象特性质谱研究.pdfVIP

SNase R135 R的C一末端缺失片段SN 构象特性的质谱研究 彭嘉柔杨峰静国忠周筠梅 (北京医科大学医药卫生分析中心 北京 100083) (中科院生物物理所生物大分子国家实验室 北京 100101) 摘要用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱与G／u蛋白酶限制酶解相结合的方法，对 金黄色葡萄球菌核酸酶SNaseR的C一束端缺失片段sNRl35的构象特性进行研究，可获得 有关该片段n一螺旋折叠状态的某些结构信息。 1．前言。对蛋白质折叠成其天然的三维结构的过程规律的探索是蛋白质研究中的一个 热点问题，因而有关新生肽链折叠的研究自然为各国科学_工作者所关注。金黄色葡萄球菌核 酸酶SNase和它的类似物SNaseR(它的N一末端带有七个额外的氨基酸残基)的C一末端缺 失片段既是新生肽链折叠研究的理想模型…，也是蛋白质折叠中间态和变性态研究的模 型_…，因而核酸酶C一末端缺失片段构象的解析，对于揭示新生肽链折叠的可能途径和近生理 条件下蛋白质折叠及变性中问态的构象特性研究均有重要意义。 已用远、近紫外CD、●11’tR、ANS荧光等方法对一系列SNaseR的c一末端缺失片段的溶 R相 液构象特性进行r研凳”，得到了不少有用的结构信息。如探知SNRl41构象与SNase 似，而其它片段的二级结构具有更多暴露的疏水表面等。不过以上方法给出的只是这些片段 溶液构象的一砦总体信息，对它们的结构细节仍知之甚少。同时由于这些肽段结构比较松散， 析蛋白质溶液结构的方法，近年来得到了迅速发展和广泛应用f4J。但是由于具有天然氨基酸 序列的SNase的C一末端缺失片段彳i稳定，导致其NMR谱峰重叠情况十分严重，使实际应用 受到很大限制。辅以定点突变等方法后虽有改善，但突变的引入使所测结果在相当程度上并 不能代表原有片段的真实的溶液结构。 近年来质谱技术迅速发艘，尤其是基质辅助激光解吸电离飞行时阅质谱(bIALD!一TOF —MS)和电喷雾电离质谱(ESI—MS)的出现，以前所未有的灵敏度、准确度和分析速度为研究 蛋白质及其他生物大分子提供了强有力的工具。特别是质谱与酶促降解或化学修饰等方法相 结合，对阐明蛋白质一级结构方面显示了强大威力悼1“。丽日前大量卓有成效的研究表明，质 谱在研究蛋白质的高级结构方面也大有发展潜力I”。 在对金黄色葡萄球菌核酸酶SNaseI{的C一末端缺失片段SNRl02的构象特性进行初步 探讨的基础J二-…，我们继续用MA 对SNase R的C一末端缺失片段SNRl35的构象特性进行研究，获得了有关该片段j二的a一螺 旋折叠状态的某些结构信息。 2．实验部分。 26 2 f：}．金黄色葡萄球菌核酸酶sNas·、|{的L．术端缺丧“段sNl{I35的纯海1‘粉 M^I H1中科院牛物物理所提供…n1．．Ij、肽电泳fn 4限抑制利，购自 f，r+ 起形成SNasc Phamalcid公i可．芭可以绵台北、、。M的i。f祁f毒．并’j f川。一I，(I，¨二 几复合物。：井f酸(5illil[i…；{州-id、岐fZ嚣f蠡量锭iKfq；i管试制为H})尘“。6^ 、i 1 2 仪器 f JI一1700剖M．～lI)I一‘r()rsf芷器糸美西l…州＆n，IIm公r订单产．线 障1三“距离l7…自n造电Ⅲ30¨、、!澉比器波f亡3{j…“激光能量在2～i01tjCt嘲阍币．质 I*圈乃50—JOO次单0(-1f{*的累加、 ：3实验疗法 2．3 限制酶解：将1sn旧mI的卜N 糸中身l(}IllM，，L的(：。。，j～R135I¨J‘”的峰尔比匀1：7