长白山白眉蝮蛇蛇毒精氨酸酯酶荧光淬灭研究.pdfVIP

第27卷增刊 福州大学学报(自然科学版) V01．27 1212坚!旦 !!!型!!墨些竺型坐!唑!型!!哩!!!|望!!生 §!P：!塑! 长白山白眉蝮蛇蛇毒精氨酸酯酶的荧光淬灭研究 孙明忠，丁兰，赵大庆，倪嘉缵 (中国科学院长春应用化学研究所．吉林长春130022) 撞要：交替使用DEAESephadexA一50离子交换和scphadexG-75凝腔过滤层析技木，从长白 山自眉蝮蛇蛇毒(一础扛抛出_blomhoffllUssurensb)中纯化得到了一种分子量为29458土15Da舶 精氨酸醋酶活性组分．本文研究了碘离子(I一)和丙烯酰胺(Act)对这种精氨酸醋酶的荧光光谱的淬 54％的荧光，Acr可以将精氨酸醑酶荧光淬灭殆尽I一和Acr对长白山白眉蝮蛇蛇毒精氨酸醋酶 荧光淬灭作用的结果表明：在精氨酸酯酶中含有两种类型的色氨酸残基，而且处于不同的徽环境 当中． 关键词：蛇毒；精氨酸酯酶；荧光淬灭 中图分类号：0657文献标识码：A 蝮亚科I及喹科蛇毒禽有精氨酸酯酶活性成分，这类酶对凝血系统有着重要的作用，它具 有明显的抗凝血作用，并且对血小板不起凝聚作用，因此是治疗血管栓塞性疾病非常有效的 G一75 SephadexA一50、Sephadex 药物“，，以吉林长白山白眉蝮蛇蛇毒为原料，经DEAE 和DEAE A-50三步柱层析，我们纯化得到了一种精氨酸酯酶活性组分．SDS一聚 Sephadex 丙烯酰胺凝胶电泳检撼为单一区带，基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱测得其准确的分子 458±15 量为29 Da(2J．本文研究了典型的离子型荧光淬灭剂I一和极性非电荷荧光碰撞淬 灭剂Acr对精氨酸酯酶的淬灭作用。考察了它们的淬灭机理和精氨酸酯酶中色氨酸残基的 类型和所处的微环境． 1实验材料和仪器 精氨酸酯酶样品由长自山白眉蝮蛇毒经三步柱层析制得；r一试剂(KI)为国产优级纯： Acr为瑞典Pharmacia公司产品． UV～922分光光度计 精氨酸酯酶浓度确定采用Folin-Phenol法。’在意大利Kontron 上进行；分子量的测定在LDI一1700激光解吸质谱仪上进行；荧光光谱的测定在日本岛津 ClTI四通石英液体池，激发波长狭峰为 W氲灯，1 RF～5000型荧光分光光度计上进行，150 3nm。发射波长狭峰为5llm． 2结果与讨论 收稿日期：1999--05—10 作者筒介：孙明忠(1971-)，男，博士研究生． 基金项目：吉林省科委资助项目(962907) ·98· 福州大学学报(自然科学版) 第27卷 。 2．1I-对精氨酸酯酶的荧光淬灭作用 I一作为一种典型的离子型荧光淬灭剂，它对精氨酸酯酶的荧光淬灭作用符合Stem -Volmer公式： ，。／F=I+K。【Q】 (1) 其中：F。和，为样品加入淬灭剂前后的荧光发射强度；K。为荧光碰撞淬灭常数，【Q】为淬 灭剂的浓度． ‘