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白腐真菌的分离及其降解几种染料特性的研究 消华大学环境科学与工程系李向]{_文湘华林刚 一、前言 自腐真菌因为其对难生物降解物质的极强的降解能力和特殊的代谢类型成为近年来 国内外研究的热点。白腐真菌集多种优越性于一身．其降解功能表现出高效、低耗、J1谱、 适_}{j性强等特点，有别于一般微生物，在环境治理方面不火为是有希望有前途的技术与f。具。 但目前，在环境治理方面应用白腐真菌还有许多问题需要研究解决。国内有关白腐真菌在环 境污染治理方面的研究和应用还十分有限，还没有筛选出我国生K的、有良好应J【；|j前景的自 腐真菌菌种。 本研究的目的是，筛选出我国特有的白腐真菌菌种，确定其生长条件及其降解H标化 台物的效果．分析研究白腐真菌的降解机制，为自腐真菌在我国环境污染治理中的应用提供 理论及技术支持。 二、试验方法 (一)菌种 实验用到P．C和F1两株菌种。P．C是来自国外的菌种，F1是自行采集分离出的…株白 腐真菌。 F1采集及主要分离步骤如r。从京郊区树林中采集有自腐真菌生长树枝，置304C的 生化培养箱中保存。保持一定的湿度，待新的白腐真菌生长出来后，接种新生的白腐真龋剑 马铃薯一琼脂固体培养基上．培养。反复转接即可得到纯种白腐真藩。 (二)培养基 采用固体和液体两种培养基： KH2P04， 1．马铃薯一琼脂固体培养基成分：2009土豆浸出液，209葡萄糖，209琼脂，39 1．59MgS04。 2．液体营养限制培养基成分：KH2P0429／L，MgS04o．259／1．，CaCl20．19／L，MnS04，VBl5mg／L， 酒蕾i酸铵O．29／L，葡萄糖209／I．。 培养条件：固体培养基采用生化培养箱培养、液体培养基采用摇床培养。 (三)白腐真菌降解特性研究 1、降解目标化合物为染料，包括刚果红、活性翠蓝KN．G。 2、试验步骤： (】) 菌种的扩大培养：液体营养限制培养基(NLM)摇床培养白腐真菌(P．C．和F1) 再天。 (2) 洲白腐真菌培养基溶液的菌种湿重。摇匀溶液，取10ml，4000转／分钟条件F离 心分离，弃去上清液。测得溶液中自腐真菌的湿重浓度。 (3) 配制含有不同染料浓度的液体营养限制培养基，每250ml三角瓶中装溶液100mI， 。 121℃下灭菌20分钟。 (4) 每个三角瓶中移入3ml上述培养的菌溶液，30(2、180转／分钟F摇床培养。 (5) 定时取样，用紫外可见分光光度计测定染料浓度。测定前摇进行预处理，对于较 污浊的试样，先离心分离，在用微滤膜过滤；对于较清澈的试样，直接用微滤膜 过滤，然后测样。 (6) 采朋上述同样步骤制作空白样，染料溶液中不含有白腐真菌生长所需的营养物。 三、实验结果与讨论 (一)卣种分离的到一株自腐真菌，暂时命名为Fl。 (，)扩人培养 87 354CF同体培养，两天后，P．C和Fl都在培养基表面形成一薄层，P～争微粒状，易 ]：与培养基分离；F1与培养基结合十分紧密，不易于分离。 30。C 180转／分钟下培养一天后，三角瓶中形成直径lmm一2mm的菌丝球，Pc成球较均 匀，F1菌丝球人小不均匀。 (二)降解染料 1、通过营养限制试样和空白试样相对比．降解初期，主要作_i：}j是自腐真菌对刚果红的吸刚， 两者相对应浓度的降解卣分率接近。但是，随着反应时间的延长，营养限制试样中刚果红的 浓度继续稳定降低，而空白试样浓度则降低很慢，甚至出现浮动。可以看到在营养限伟I试样 中，菌丝球的颜色由暗红慢慢变浅，而空白试验中菌丝球的颜色基本没有变化。 2、P．c．和Fl对刚果红的降解效率都很高，对于40mg／L、65mg／L的原溶液，两株菌的脱色 效果相近，但是，对于较低浓度20mg／L的原溶液，P．C．的脱色效果比F1稍好(见圈1)。 一，暑曼趟璐窭蒜 ∞∞加∞0 ∞∞∞∞∞ 1 2 强验时佃(d)5