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05.12.30 细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证⑵ 验证方法 试验组 菌液组 稀释剂对照组 供试品对照组 细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证⑶ 结果判断：供试品组的菌回收率、对照组的 菌回收率。 判断标准: 菌回收率均不低70% 。 控制菌检查 修订特点: 减少篇幅 不作具体生化试验的规定 增加鉴定方法 适应微生物分类变化要求 增加控制菌检查项 控制菌检查法的验证⑴ 试验菌株：按规定检查的控制菌选择相应验证的菌株。 阴性对照菌株:金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、梭菌用大肠埃希菌；大肠埃希菌、沙门菌、大肠菌群用金黄色葡萄球菌。 菌种的要求：不得超过5代。采用适宜的方法保存。 菌液制备:10～100cfu。 控制菌检查法的验证⑵ 验证方法：试验组、阴性菌对照组。 结果判断：试验组应检出、阴性菌对照组不得检出。 药品微生物限度检查法验证试验结果不符合要求的处理方法 中和法 培养基稀释法 薄膜过滤法 离心沉淀法 联合方法 供试液制备 ● 表面活性剂、中和剂或灭活剂：应证明其有效性及对微生物的生长和存活无影响。 ● 供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。 ● 供试液制备若需用水浴加温时，温度不应超过45℃。 ● 供试液的体积：100ml。 非水溶剂供试品增加:十四烷酸异丙酯法 注意 ● 薄膜过滤法的验证实验中,冲洗剂和冲洗量需验证. ● 菌液的稀释过程。 ● 霉菌酵母菌温度为23-28℃。 ● 沙门菌的供试品检验量应增加为10g及10mL。 ● 无菌检查法验证(1) 试验菌株：金黄色葡萄球菌.铜绿假单胞菌.白 色念珠菌.枯草杆菌.黑曲霉.生梭胞菌。 菌液制备: 小于100cfu。 供试品：按规定量取样. 无菌检查法验证(2) 验证方法：薄膜过滤法、直接接种法。 结果判断：培养基应澄清。或虽显浑浊但经确证无菌生长,判供试品符合规定。 注意 ● 供试品检验数量,薄膜过滤法应增加1/2的最小检验数量作阳性对照,直接接种法,应增加1支作阳性对照。 ● 在薄膜过滤法中,冲洗剂和冲洗量需验证。 ●直接接种法中,若阳性阳性结果微生物生长缓慢.微弱,可采用薄膜过滤法,并重新进行方法验证。 注意 ● 2005年版药典中稀释剂.冲洗剂改为0.1%蛋白胨溶液或ph7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液。 ● 非水溶剂供试品增加:十四烷酸异丙酯法。 ●无菌实验尽量采用薄膜过滤法。 * 起草的指导思想: 完善检查法. 增加试验的可操作性. 使方法更具科学性，保证检验结果 的准确性. 与国际接轨. 微生物限度检查法 ● 验证的目的: 确认所采用的方法适合于供试品的微生物限度检查。 ● 验证的意义：保证检验结果的准确、可靠及检验方法的完整性。 ● 微生物限度检查法验证的必要性 理论、试验结果 ● 验证的内容 准确性(回收率)、专属性 验证的类型 ● 前验证: 建立药品的微生物限度检查法时. ● 再验证: 修订的检验方法;供试品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时 ;定期的方法验证. 验证用菌株：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠 菌、黑曲霉、枯草杆菌。 菌株选择的原则:代表性,普遍性,低或非致病性,标准 菌株(或该药品中常见的污染菌)。 菌种的要求：不得超过5代。采用适宜的方法保存。 菌液制备:50～100cfu。 细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证⑴ *