不同条件下Percoll密度梯度离心分离组织细胞浮游生物的比较.pdfVIP

中．睁湛旨謦嚣拖CHINJFORENSICMED2007年第22卷第3期 慧1，翟仙敦1 何方刚1”，刘 良1，黄代新1，杨庆恩1，李小廷1，尹 【摘要】目的实验评估不同条件下Percoll密度梯度离心分离组织中浮游生物的效果。方法大白兔肝组织匀 浆后与3种藻类混合物混匀，分为混匀高速分离组、混匀低速分离组、叠加高速分离组、叠加低速分离组和未分离组 rDNA和 (对照组)进行Percoll密度梯度离心分离浮游生物，镜检并提取其DNA，用PeR技术分别检测浮游生物16S 叶绿素基因特异性片段。结果混匀高速分离组有较多浮游生物呈分层条纹状分布于离心管中部，叠加高速分离组 浮游生物紧邻组织细胞层下，低速分离组见较少浮游生物紧邻于组织细胞层之下，未分离组见浮游生物和组织细胞 16S rDNA片段及1条 混杂沉于管底；经DNA检测，各分离组组织细胞层下液体均可检出浮游生物的1条447bp 194bp叶绿gt／叶绿素脱辅基蛋白基因片段，未分离组均未检出扩增产物且背景较深。结论混匀加样方式进行高速 Percon密度梯度离心，合并收集组织细胞层下所有液体，是分离浮游生物的最有效方法。 【关键词】法医病理学；溺死；浮游生物；密度梯度离心；PercoH液 【文献标识码】A 【文章编号】1001—5728(2007)03—0153—04 A researchon fromHverdifferent density comparative planktonsseparated by gradientcentrifuga- tionwithPercoHin a1．／o Forensic rabbits(△HE Dai—xin，et of Fang—gang，LIULiang，HUANG Faculty Scienceand 430030，China) Medicine，乃，画MedicalCollegeofHuazhongUniversityof Technology，Wuhan To evaluatetheeffectofdifferent 【Abstract】Objectiveexperimentally densitygradientcentrifuga— tionon fromtissueswithPercoll．MethodsMixtureofthree withtheho- planktonseparation algaespecies ofrabbitliverweredividedinto5 at mogenate centrifugationgroups：well—mixedhomogenatehigh-speed at at eentrifugat