黑鲷(Acanthopagrus schlegeli) CXC型趋化因子的体外表达及其生物学活性.pdfVIP

高技术通讯 年 月 第 卷 第 期 2008 3 18 3 黑鲷（ ） 型趋化因子 Acanthop agrus schlegeli !! 的体外表达及其生物学活性! ! ! !! 张 勇 蔡中华 高春萍 邢克智 （清华大学深圳研究生院 深圳518055） ! （大连水产学院海水养殖与生物技术重点实验室 大连 116023） !! （ 天津农学院养殖与生态重点实验室 天津 300384 ） 摘 要 采用DNA 体外重组技术，将一个黑鲷 CXC 趋化因子基因亚克隆到pOE30 表达 载体并转化到大肠杆菌（ ）中诱导表达后，利用 递降的缓冲液从金属亲和柱洗脱含 M15 pH 6xHis 标签蛋白的方法得以纯化，纯化产物的分子量约为8kDa，表达量约占蛋白总量的 25 % ，以6xHis 单抗为一抗，采用Western-bIotting 方法鉴定获得的蛋白为目的蛋白。对表 达产物进行生物活性鉴定表明，该蛋白具有显著的嗜中性粒细胞和巨噬细胞的趋化活性 （ ， ），它对嗜中性粒细胞和头肾巨噬细胞的趋化能力呈剂量依赖性，且对 P 0 .01 P 0 .05 嗜中性粒细胞的趋化能力大于对头肾巨噬细胞的作用，还能诱导改变嗜中性粒细胞和巨 噬细胞对细菌的吞噬活性，但对嗜中性粒细胞吞噬能力的改变小于巨噬细胞。该趋化性 因子在结构和功能上属不完全ELR + CXC 型趋化因子，兼具ELR + CXC 和ELR - CXC 趋化 因子的活性，是一种不成熟ELR + CXC 型趋化因子。 关键词 黑鲷（ ）， 趋化因子，重组表达，生物活性 Acanthopagrus schlegeli ELR + CXC 氨基酸间隔，形成 结构，定位于第 条染色体 CXC 4 上；而 型趋化性因子的 个 相邻，为 结 0 引 言 CC 2 Cys CC 构，定位于第 条染色体上。根据 前是否含 17 CXC 趋化因子是一类由 个氨基酸组成的小 有 （ ）个氨基酸组成的基序（ ）， 92 ~ 125 GIu-Leu-Arg ELR 3 motif 分子多肽类细胞因子，具有趋化炎性细胞向病灶部 CXC 趋化性因子又可分为 ELR + CXC 和