普洱茶不同发酵时期微生物群落宏转录组学研究.pdfVIP

第 39卷 第 6期 北京化工大学学报 (自然科学版) VoI_39．No．6 2012往 2O12 普洱茶不同发酵时期微生物群落宏转录组学研究 姜 妹 吕 杰 李 灏 (北京化工大学 生命科学与技术学院，北京 100029) 摘 要 ：分离提取了普洱茶发酵前期和发酵 中期茶 叶样本 中的微生物菌群全 mRNA，并通过 Illumina测序得到普 洱茶发酵前期 17376转录文本结果 以及普洱茶发酵 中期 14456个转录文本结果 。对测序结果的注释结果表明黑 曲 霉 (Aspergillusniger)在两个 阶段都 占有绝对优势 ；对两个样本差异表达部分 GO功能和 KEGGPATHWAY的对 比分 析表明，适应渥堆发酵环境变化的微生物(如黑 曲霉等)对普洱茶发酵过程起到了决定性的作用 。 关键词 ：普洱茶 ；渥堆发酵 ；宏转录组学 ；微生物群落 中图分类号 ：Q789 本文对普洱茶发酵初期和中期的两个样本进行 引 言 了宏转录组学对 比分析 ，通过 比较两者 的差异来分 普洱茶是 以晒干的云南大叶种毛茶为原料 ，经 析微生物群落在普洱茶发酵前中期的群落结构及代 一 系列复杂工序制成的一种茶。现代普洱茶制造 中 谢表达的变化及其在普洱茶品质形成方面的影响。 最为重要的工艺渥堆发酵，是以微生物活动为中心 1 材料与方法 的微生物固态发酵… 。在这一发酵过程 中，微生物 对于普洱茶品质的形成起到了极其重要的作用 。 1．1 样本制备 ， 从 20世纪70年代后期开始，人们对 于普洱茶 样本采集于云南省普洱市中国普洱茶研究院普 发酵过程中的微生物进行了研究 ，研究方法主要是 洱茶加工示范车间于2010-06—16至2010-07—12渥 传统的平板培养法 ，后来又出现了显微观察及显 堆发酵过程中的普洱茶 ，渥堆总数为 5t，发酵过程 微摄影法加 以辅助 ，直到近几年才出现使用分子 为：普洱茶 良种场基地 的鲜 叶(云南大叶种三、四 生物学手段对分离微生物进行鉴定 ，如利用 PCR- 级)一杀青一揉捻一 晒干一 晒青毛茶一 晒青毛茶拼 DGGE对群落结构变化进行分析 。而现有研究仅 配一增湿渥堆 (2010—06—16)_+翻堆 (2010—06—19) 反 映普洱茶发酵过程 中的微生物组成和变化 ，对实 一翻堆 (2010—06—22)一翻堆 (2010—06—26)一翻堆 际过程中的代谢反应只能推测。为了原位实时分析 (2010-07_05)一通沟 (2010-07-12)。 不同时期微生物 的基因表达 ，从而获得其代谢过程 选取渥堆中距边 缘 1m 以上的 4个代表性 的 中酶的生产 ，全面了解不同阶段微生物 的作用，必须 点，翻堆时分上、中、下 3层混合样 ，每次取样 100g 左右 ，称出10g茶样放入无菌匀浆袋中，加入 90mL 引进新的技术。宏转录组学是后基因组时代最具代 0．8％吐温 ，匀浆拍打 3min，最后加入 RNA保存剂。 表性 的新技术 ，它可在样本较少时获得偏差较小 的 样品 1取 自2010—06—17发酵开始第 2天 (发酵初 结果 ，目前宏转录组学只在海洋