ERM基因和多药耐性相关蛋白MRP2(ABCC2)定位关系的研究.pdfVIP

ERM基因与多药耐性相关蛋白MRP2(ABCC2)定位关系的研究 00032 38号，2 杨青1大贯玲子2杉山雄一：(复旦大学药学院，上海市医学院路1 1． 30033) 日本东京大学药学部，药物动态学教研宜，东京丈京区本郯，11 摘要 多药耐性相关蛋白MRP2(ABCC2)广泛分布于哺乳动物的小肠、肝和肾，并专一性地 radixifl和czrill蛋白对人小肠中MRP2顶侧膜定位 定位于极性细胞的顸伽,1朕o-上。为了49i,-j LIdixin、 czri 的影响，运用RNA干扰技术构建了稳定的F n缺损的CaCO一2细胞；使用该细 xin、ez 胞系进行细胞表面生物素标记实验，发现radi rill的缺失导致了细胞表面MRP2的减 xi n、czrin定位于Caco一2细胞的顶侧膜；免疫沉淀实验表明， 少。免疫染色实验表明，radi r Xin、 xin、cz J／g中radi CaCO一2细胞中MRP2与radiin结合在一起。这些结果说明在Caco-2-；m Xill，CZ CZrill均被MRP2的顶侧膜定位机制所需要。radirin在MRP2顼侧膜定_i4；c-,I中起 相似的作用，它们的表；查水平及细胞下分布是在翻译后水平调控MRP2的重要因素。 材料 人MRP2(ABCC2)卟兜降抗体MiIII一6(Alexis，San Cruz Temecula，CA)，ij{别所仃ERM货f’J的多兜降抗体Ezrin(C一19)(SantaBiotechnology， clone Santa moesin及radixinn，J啦兜降抗体anti—moesin Cruz，CA)，议”0 38／87(Sigma)，ezrin Ab—l(3C12)(Lab 尊克降抗体ezrirdp81／80K／Cytovillin 体M11 ratanti—mouseezrin承蒙_i都大学J j见早智f先生馈始，ZO一1多范降抗体(Zymed San Laboratories，South (Sigma—Aldrich，St．Louis，MO)，{}二必需氰墟艘(hwitrogen)。 Caco一2细胞培养于含4500 {E必需 m∥L筒萄糖的DMEM培养丛，内含10％小小血清， U／m1)，链镶素(100 氨址酸(Invitrogen)，ri诉素(100 pg／m1)。j啬养箱没K为37。C，5％C02， 95％泓度。 方法 Western blotting rain(3500 用含仃PMSF的PBS收集细胞，超乍波破碎10S，离心10 rpm)，一}：消液即细胞