从石蜡包埋组织高效提取RNA的优化及Shh的RT-PCR检测.pdfVIP

第39卷 第4期 山 东 大 学 学 报 (理 学 版) 2004年 8月 V01．39 No．4 JOURNALOFSHANDONG UNⅣERSIrIY Aug．2O04 文章编号 ：1671．9352(2004)04-0101．03 从石蜡包埋组织高效提取 RNA的优化 及 Shh的 RT—PCR检测 曹慧仁 ，张元鑫，张红卫 (山东大学 生命科学院，山东 济南 250100) 摘要 ：从石蜡包埋组织 中提取高质量的RNA是对肿瘤实体组织进行分子生物学研究的重要方法之一 ．利用人的 胃 肠道肿瘤材料，通过蛋 白酶K消化 ，经酚．氯仿、异戊醇抽提去蛋 白及异丙醇沉淀，优化 了1套从石蜡包埋组织中提 取 RNA的方法 ，提高了所提取 RNA的质量和产量 ．所得 RNA经电泳检测 ，并进行 RT-PCR扩增 Shh(osnichedgehog) 信号分子，结果良好 ．故认为此提取 RNA的方法值得推广． 关键词 ：RNA提取 ；石蜡包埋 ；蛋 白酶K 中图分类号 ：R522 文献标识码 ：A AneffectivemethodforRNA isolation from paraffinembeddedtissuesandShhdetectionbyRT-PCR CAO Hui—ren．ZHANG Yuan—xin ZHANG Hong-wei (SchoolofLifeSciences，ShandongUniv．，Jinan250100，Shandong，China) Abstract：Paraffinembeddedtissuesareknown tobepoormaterialsformolceularbiologicalapplication． Usinggastroenterictu． mormaterials，byProteinaseK digestion，phenol／chloroform ／isoamylaleoholextractionandisopmpylalcoholprecipitation，we advancde theroutinetotalRNA extractionmehtod，forhteextractde RNA didnotshow apparentdeoadation．Afterchecking up hteRNAqualitybygelelcetrophoresis，wedetcetdeShh(sonichedgehog)byRT-PCR，hteresultswerealosfavorable．Therefore， htemehtodweadvnaede iSrceonnnendable． Keywords：RNA extraction；Ⅸlm硒nembeddde tissue；pmteinaseK 为进行实体肿瘤分子生物学研究，常常需要利 用石蜡包埋组织提取 RNA，但长期以来一直存在一 1 材料与方法 些困难 ．一方面 ，由于固定和包埋处理使得 RNA分 子被化学修饰或降解 ，不适宜进一步用于分子生物 1．1 实验材料及试剂 学研究；另一方面，固定剂所 引起 的组织蛋 白质 新鲜的人 胃肠道肿瘤组织 ，4％多聚 甲醛一PBS 一 RNA的高度交联，使得 RNA难以提取 ．我们在实验 固定液 ，DEPC，梯度酒精，二 甲苯 ，石蜡 (熔点为 过程中摸索了 1套从石蜡包埋肿瘤组织块中提取总 52．5oC)，2×蛋 白酶 K缓冲液 (2mol／LTris—C1 RNA的方法 ，而且 RT—PCR结果良好 ，与预期结果相