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实验六重组DNA分子的转化.doc
实验六：重组DNA分子的转化 实验目的 掌握将外源DNA分子导入感受态细胞的技术 二．实验原理 转化是指某一细胞系由于接受了外源DNA，而导致其原来的遗传性状发生改变，这种遗传性状包括遗传型与表型的改变。 三．实验材料 1．水浴锅、离心机、超净工作台、恒温培养箱、各式移液器、培养皿； 2.LB液体培养基、LB固体培养基、氨苄青霉素。 3.DNA样品：重组DNA分子pCR2.1-Rv1791。 四．实验步骤 ①5μl连接产物加入到感受态细菌中，置冰上10min。 ②42℃水浴90s进行热休克（不可晃动），冰浴5-10min。 ③加入800μl不含抗生素的LB，37℃， 250r/min，1hr 。 ④ 3000rpm，4min，轻轻弃掉500μl上清（留上清的量视平板干燥程度）。 ⑤加入40μl (40mg/ml)X-gal、2μl IPTG（400mmol/ml）和8μl Amp+(100mg/ml) 抗生素涂布平板，37℃培养过夜。 五．实验结果 本次实验所得平板上有蓝白菌落相对较多、切分布均匀。但部分菌落黏粘在一起，说明涂布时不够均匀，操作技术有待提高。其中白色菌落为导入了重组DNA分子pCR2.1-Rv1791，蓝色菌落未导入重组DNA分子pCR2.1-Rv1791。 六．思考题 重组基因的导入方法有哪些? 动物细胞：显微注射法微生物：Ca离子感受态细胞植物：农杆菌转化法，基因枪法，花粉管通道法
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