培养细胞的形态观察和计数.pptVIP

实验四 培养细胞的形态观察和计数 知识目标 1.熟悉培养细胞形态分类的特点。 2.掌握培养过程中细胞形态、结构变化 的规律以及细胞计数的方法。 实验四 培养细胞的形态观察和计数 1.将培养细胞从培养箱中取出； 2.在倒置相差显微镜10×的物镜下，再调节物镜使观察的细胞形态清楚，对细胞的透明度、细胞的轮廓进行观察； 3.将倒置相差显微镜转换至40×物镜，对细胞结构、内容物等作进一步的观察 4.记录上述观察结果。 （一）细胞形态结构及生长状况的观察 （二）细胞的计数 原理： 细胞计数法是细胞生物学实验的一项基本技术，是了解培养细胞生长状态以及测定培养基、血清、药物等物质生物学作用的重要手段。 细胞计数主要利用血球计数板来完成。血球计数板每一大方格长为1mm，宽为1mm，高为0.1mm，体积为0.1mm3，可容纳的溶液是0.1μl，那么每ml溶液中所含细胞数即是视野中每一大方格中数出的细胞数的 10 000倍 。 步骤： 1.准备计数板：用酒精清洁计数板和盖 玻片，然后用吸水纸轻轻擦干； 2.制备细胞悬液：用胰蛋白酶消化单层 培养细胞或收集悬浮培养细胞，制成 单个细胞悬液。 （二）细胞的计数 3.加样：将盖玻片盖在计数板两槽中间。用尖嘴吸管轻轻吹打细胞悬液，吸取少量细胞悬液，在计数板上盖玻片一侧边沿加细胞悬液，加样量不要溢出盖玻片，也不要过少或带气泡。否则要将计数板和盖玻片擦干净重新加样； 4.计数：在显微镜下，用 10×物镜观察 计数板四角大方格中的细胞数，细胞压 中线时，只计左侧和上方者，不计右侧 和下方者。 细胞数／毫升原液= （4大格细胞数之和／4）×104×稀释倍数 【作业与思考题】 1.分别将传代培养的细胞，用10×及 40×的物镜对细胞的透明度、轮廓及 内容物等进行观察并记录。 2.对培养的细胞用计数板计数， 问：①应用公式计算细胞原液的细胞数。②若每瓶传代细胞数量为1×105 ，应该怎样稀释，按1：（？）传代？ * *