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维普资讯 第 35卷第 3期 2006年7月 发 酵 科 技 通 讯 氨基酸测定的研究(上) 黎景丽 ，文一彪 (1．原广州市致美斋食品有限公司，广州510000；2广东省有线广播电视台 播出部 ，广州 510066) 摘 要：研究各种氨基酸的测定，介绍了氨酸基的测定方法 ，讨论 了氨基酸检测的主要特点。 关键词：氨基酸；测定 中图分类号 ：TS264．2 文献标识码 ：C 天然造酱油的主要生产原料是大豆 、面粉 、 ％酪氨酸= 食盐 、水 。经米 曲霉制曲、发酵 ，蛋 白酶系把蛋 白 其 中 163．1及 186．1分别为酪氨酸和色氨酸 质酵解成各种氨基酸；或豆粕经酸水解成各种氨 基酸 。氨基酸经离子柱层析分离洗脱后 ，得到各 的残基分子量。一般纯的无机酸和醇类 ，对此并 种 自由氨基酸 ，如酪氨酸 、色氨酸 、丙氨酸 、丝氨 无干扰 ；有机酸浓度低时，光吸收在校正后仍可 酸、苏氨酸、蛋氨酸 、胱氨酸 、组氨酸、精氨酸等。 应用 ，但酮、醛类有机物必须避免。样品必须溶于 若将 已知浓度的多肽或氨基酸在xym1．L下测定光 碱内，否则光密度大为减低 ，灵敏度亦大为降低 ， 密度 ，并 以光密度为纵座标 ，已知氨基酸 的微克 以酪氨酸为例 ，同一含量酪氨酸分别溶于 0．1N 数或浓度为横座标，作标准曲线 ，即可求知溶液 NaOH和 0．1NHCI中，则二种相同浓度溶液 的光 中未知浓度氨基酸的光密度及其含量。 密度显然相差甚多，见表 1。 表 1 二种相 同浓度溶液的光密度 1 酪氨酸和色氨酸测定方法 溶剂 295mix光密度 将 含酪 氨酸 和 色氨 酸 的样 品溶 于 0．1N O．1N Na0H 0．285 NaOH，在 295mI．L下测定其光密度 ，从 已知标准氨 O．1NHCI O．o05 基酸曲线就可以知道该样品中酪氨酸和色氨酸 含量 。将各种不 同已知浓度 的酪氨酸和色氨酸 1．1色氨酸测定 NaOH溶液 ，在 295mix测定其光密度 ，以光密度 色氨酸在酸性溶液中水解很容易破坏 ，所 以 为纵座标 ，酪氨酸的微克数或浓度为横座标制标 不能在酸水解液中测得真正的含量 ，必须用碱进 准曲线 图。 行水解 ，色氨酸能和对二 甲基氨基苯 甲醛 (P— 当酪氨酸和色氨酸 同时存在时，则将溶于 dimethylaminobenzaJdehyde)试剂生成蓝色 ，其颜 0．1NNaOH样品 lmL在 305m1．L和 280mI．L测定其 色的深浅与色氨酸的量成直线关系。 光密度 ，得 E 和 E瑚代人下式 ，分别算 出酪氨酸 1．1．1试剂配制 和色氨酸在每mL蛋 白质溶液中克分子含量 ： 对二 甲基氨基苯甲醛溶液 ：将 2．5g对二甲基 M色氨酸=(0．207E扩 0．280E~)xl04 氨基苯甲醛晶体溶于 100mL10％H2sO。 M酪氨酸=(0．99E~-0．032E~)xl04 2％NaNO3：以 1gNaNO3溶于 50mL蒸镏水 ，搅 并依下式换算至百分含量 ： 拌溶解。 (1) 显色 ％色氨酸= lO~