雄激素受体(AR)靶miRNA转录过程中转录复合体的形成初探.pdfVIP

釜d三学Un撮iv‘J医M学ed版S三z。·。M。y，。，(。) 29。 雄激素受体(AR)靶miRNA转录过程中 转录复合体的形成初探 张聪哲 吴 海 李 瑶6 (复旦大学生命科学学院遗传所一遗传工程国家重点实验室 上海 200433) 【摘要】 目的探讨雄激素受体(androgenreceptor，AR)调控的靶miRNA在转录过程中受到AR以及一系列 蛋白辅助因子形成的转录复合体影响的过程。方法 通过染色质免疫沉淀(CHIP)和实时荧光定量PCR (qPCR)方法，用相应辅助蛋白因子的抗体研究蛋白质和DNA的相互作用，qPCR研究蛋白质和DNA结合的增 强或者减弱。通过Westernblot实验在不同细胞系中初步研究8一羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(OGGl)和前列腺癌 恶化的相关性。结果在LNCaP前列腺癌细胞系中，进行双氢睾酮(DHT)刺激后，在AR靶miRNA的雄激素 受体调控元件(androgenresponse 呤／脱嘧啶核酸内切酶(Apel)，RNA聚合酶Ⅱ及拓扑异构酶Ⅱ等辅助蛋白因子结合量上升。通过AR和LSDl 的siRNA干扰实验，证明是由AR招募了LSDl，LSDl进而招募其余辅助蛋白因子。结论这些转录因子AR 以及LSDl、OGGI、Apel、RNA聚合醇Ⅱ和拓扑异物酶Ⅱ等一系列蛋白因子形成的转录复合物，促进了AR调 控的靶miRNA转录的发生，且该转录复合物的形成由AR的招募作用发起。 【关键词】前列腺癌；雄激素受体(AR)；miRNA；转录复合物 354 【中图分类号】Q 【文献标志码】A doi：10．3969／j．issn．1672—8467．2014．03．002 Oil of Researchformation inthe transcriptioncomplex of miRNA processandrogenreceptor(AR)target Hai．LI ZHANG YaoA Cong—zhe，WU (State Genetic Genetics，SchoolScience KeyLaboratoryof Engineering—Instituteof ofLife Fudan 200433，China) University，Shanghai Todiscusstheformationandcombinationof formed [Abstract]Objective complex transcription by other wouldinfluencethe ofAR cofactors，which androgenreceptor(AR)andprotein transcription miRNA．MethodsWe focusedontheformationof inwhic