Bmi-1基因表达与人骨髓间充质干细胞增殖关系的探讨.pdfVIP

维普资讯 第28卷第 6期 南京医科大学学报 (自然科学版) 2008年 6月 ACTAUNIVERSITATISMEDICINALISNANJING(NaturalScience) ·717 · Bmi．1基因表达与人骨髓间充质干细胞增殖关系的探讨 刘 娜，李文磊，贾 鹏，朱东亚 ，叶 民 ，丁新生 (南京医科大学第一附属医院神经科，江苏 南京 210029；南京医科大学药学院，江苏 南京 210029；南京医科大学附属脑 科医院神经科。江苏 南京 210029) [摘 要] 目的：建立人骨髓间充质于细胞 (hMSCs)的体外培养体系，研究 hMSCs表面抗原的表达情况 ，以及体外传代培养对 Bmi一1基因表达变化的影响，为进一步探讨Bmi一1基因在hMSCs增殖中的作用及调控机制提供依据。方法：骨穿抽取骨髓，以 1．077g／ml的Ficol1分离液梯度密度离心，收集单个核细胞进行培养和传代，观察细胞形态和生长周期。取 P4代的hMSCs，流 式细胞仪检测细胞表面抗原的表达情况。通过SA—B—gal的染色检测细胞的老化程度，通过抽提各代次细胞的RNA，逆转录PCR 定量Bmi一1基因量的变化，分析与细胞倍增代数的关系。结果：体外培养的hMSCs贴壁生长，呈长梭形，可增殖形成克隆。经分 离纯化培养后，流式细胞仪显示细胞表型为CD13，CD105，少量表达CD33，不表达造血细胞的标志CD34及CD117。SA—p—gal的 染色显示随细胞培养时间延长，SA—B—gal染色更明显和清晰。逆转录PCR显示随传代次数的增加，hMSCs的增殖能力逐渐下 降，Bmi一1基因表达随培养时问而减少。结论：本培养体系可获得纯度较高的hMSCs，具有强大的增殖能力。Bmi一1基因极可能是 影响MSC增殖能力的一个重要基因。 [关键词] 骨髓间充质干细胞；贴壁培养；表型；Bmi [中图分类号] R329．28 [文献标识码] A [文章编号] 1007—4368(2008)06—0717—05 RelationshipofBmi一1geneexpressionandhumanmesenchymalstem cellreplication LIU Na，LIWen—lei，JIA Peng，ZHUDong—ya，YEMin ，DINGXin—sheng (DepartmentofNeurology，theFirstAffiliatedHospitalofNJMU，Nanjing210029；1SchoolofPharmacy，NJMU， Nanjing210029；DepartmentofNeuroloyg，NanjingBrainHospitalAfl；liatedtoNJMU，Nanjing210029，China) [Abstract] Objective：ToestablishtheculturalsystemofhMSCsinvitro，investigatethechangesofBmi一1geneexpressionindifferent passages，andexploretheeffectofBmi一1inhMSCsreplicativesenescence．M ethods：hMSCswereisolatedfrom thefemurbonemarrow usingadherencemethodandculturedinL—DMEMwith10％fetalbovineserum (FBS)．The4thpassagehMSCswerepickedupfor analyzingexpressionsofcellsurfacephenotype，andthe1st，3rd，6th，9th，12th，15thand20thpassageswereexaminedofBmi一1 geneexpressionbyRT—PCR．Results：hMSCsweresuccessfullyisolatedrfom thefemurbonemarrow whichwerepositiveofrCD13， CD105，CD33andnegativeofrCD34，CD38，CD117，CD45．TheSA—p—galstainingshow