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药物代谢动力学的主要研究内容 生物样品分析技术 液相质谱检测MRM色谱图 质谱检测器原理 只要被测化合物能构被离子化，质谱是能检测到带电的离子，最后得到的是离子强度随时间变化的函数称质量色谱图 质量是化合物的特有性质之一，所以质谱检测要优于紫外检测。 液相色谱及液－质联用技术在药物分析方面发表论文统计图 如何提高分析方法的灵敏度 样品处理过程 进样量 HPLC条件的优化 MS条件的优化 一、处理样品方法的选择样品 液液萃取（可以起到浓缩待测物的作用） 固相萃取SPE（也可以浓缩但成本高） 沉淀蛋白（稀释样品） 有机溶剂沉淀法 盐沉淀法 强酸沉淀法 二、进样量 进样量直接影响信号的响应，大进样量可以提高灵敏度，但是受色谱柱载样量的限制，而且对色谱柱及质谱仪的损害较大。所以应当越小越好。 溶解样品的溶剂也会直接影响色谱行为 进样体积也会影响峰型 在梯度洗脱时，可以加大进样量以提高灵敏度 三、HPLC条件的优化I 色谱柱选择 由于LC－MS分析对色谱分离要求不是很高。所以可以使用短的色谱柱，这样可以节省流动相用量，缩短分析时间 而且使用短色谱柱还能提高灵敏度 流动相中有机相比例尽量高。还可以在流动相中加入一些化合物来提高质谱的信号强度（如甲酸，一些醚类） 针对不同的分析物选择相应的色谱柱 三、HPLC条件的优化I 色谱柱选择 要对各种厂家的色谱柱有所了解对于一些特殊的化合物必需使用特殊的色谱柱进行分离 相关的知识可以向色谱柱供应商索取 大多数著名的色谱柱厂商都有自己的色谱柱分析数据库里面可能会有你意想不到的信息 三、HPLC条件的优化II 流动相的选择 与传统的HPLC－UV分析有所不同，在HPLC－MS分析中，要求流动相的有机相比例越大越好，出峰时间尽量靠前（在没有基质效应的情况下） 流动相中不能有不可挥发性的盐如磷酸盐 有些在HPLC中使用的扫尾剂如三乙胺和离子对试剂三氟乙酸都会影响质谱的响应信号 三、HPLC条件的优化III 流速的影响 流速对LC－MS分析有影响 MS属于质量型检测器与流速有关 UV属于浓度型检测器与流速无关 对反相色谱而言，提高有机相比例色谱峰会提前，UV峰面积不会变化，MS的峰面积会增大很多 提高流速同样是LC－MS分析提高灵敏度的方法之一 三、HPLC条件的优化IV 洗脱方式 一般采取等梯度洗脱，这样分析速度快 但有时也会采取梯度洗脱如分析多肽类化合物一般采取梯度洗脱，此时的信号会比等梯度洗脱时强很多，而且可以加大进样量。是提高灵敏度的一种措施，但是分析时间较长。需要有平衡的时间。 梯度洗脱问题－－梯度延迟 三、HPLC条件的优化IV 柱温对色谱行为的影响 依那普利 特殊问题 疏水崩塌 四、质谱条件的优化I HPLC－MS分析的灵敏度之所以比UV高就在于质谱的灵敏度很高，而且选择性很好，尤其是MRM方式在生物样品分析中能有效的排除杂质的干扰。甚至于可以不处理生物样品直接进行分析。 四、质谱条件的优化II MS条件的优化主要目的是尽量提高待测物的质谱响应信号。主要参数有ESI 喷雾电压、APCI的电流、 DP值、 碰撞能量，雾化气 辅助气的流速，离子源的温度。 另外还有质谱的分辨率也会影响信号强度 四、质谱条件的优化II 质谱的分辨率影响信号强度 数据采集速度 数据采集速度 数据采集速度 如何提高灵敏度—总结 HPLC条件的优化 色谱柱选择 流动相的选择 流速的影响 洗脱方式 柱温 疏水崩塌 API 4000 Operator Course MS 检测 质谱仪的组成 质谱仪的共同特点 质谱仪类型 色谱?质谱联用技术 气相色谱?质谱联用技术 液相色谱?质谱联用技术 液相色谱?质谱联用技术需解决的问题 色谱?质谱联用技术接口 哪种离子化方式? 离子化和破碎 API离子化方式 -- ESI ESI特点: 软电离技术，适于极性和中等极性化合物分析。 流速为3 ml/min – 1 ml/min 。 易形成Na, NH3, H2O，CH3OH等加合离子及多电荷离子 待测样品应易溶于甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈、丙酮、水等。 流动相中不能含不挥发性的酸、碱、盐。但允许有少量的挥发性酸如甲酸、乙酸、三氟乙酸等，挥发性碱如氨水、三乙胺等，及低浓度的挥发性盐如醋酸铵（小于20 mM）。 流动相的酸碱性及离子强度对灵敏度有较大的影响，应对流动相的pH等进行优化。 API离子化方式 -- APCI APCI特点： 适于具有挥发性的中等极性及弱极性化合物的分析。与ESI相比，易产生碎片离子。 流速为100 ml/min―2 ml/min。 流动相的酸碱性及离子强度对灵敏度影响较小。 一般情况，APCI灵敏度较ESI低，稳定性较好。 MS 检测器是如何工作的? MS 检测器连续不断地得到质谱信息