3-圆盘电泳课件(按改进版).pptVIP

特别提醒 样品浓度及加样关系 样品来源：[说是最纯的样品，实际并不纯，正好做电泳] 沃宏（Wo Hong ） 738328 10g LOT2010/04 样品名称： 牛血清白蛋白 [ BSA ] [Albumin Bovine; from bovine serum; Mr:68000] 样品配制： 1.0mg/ml; 加样体积： 20.0ul ，也可以，但色带较宽（可能 与加样体积过大有关），另外三条色带其中一条较淡，有的 当时难辨认，不是很清楚，或有或无的感觉。 建 议： 4.0mg/ml; 加样体积： 10.0ul 聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳 1、实验原理 聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳是以丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺，在催剂的作用下聚合而成的具有三维网壮结构的大分子凝胶作为支持介质的一种区带电泳。在这种电泳中由于采用了凝胶孔径，pH值，缓冲液成分和电位梯度的不连续系统，因此它具有高分辨率的三种效应，即：浓缩效应，分子筛效应和电荷效应。在凝胶中当对被分析的样品进行这种电泳时，样品中的各成分首先经过浓缩，然后再根据他们各自所带电荷，分子量的大小以及形状的差异，以不同的迁移率电泳分离而成带。 因本实验是采用聚丙烯酰胺凝胶在垂直的小玻管中进行的，经电泳后分离的样品带形似圆盘，因此称之为垂直管型聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳（简称圆盘电泳）。 2、目的与要求 用圆盘电泳的方法分离蛋白质样品，通过实验了解和熟悉应用聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳进行分析的方法和实验过程。  3、仪器、器材与装置 ： 3-1、实验仪器： （1）、 电 泳 仪： (a)：EPS604稳压稳流电泳仪 (南京科保仪器研究所) (b)：DYY-6C和DYY-7C型电泳仪 (北京市六一仪器厂) (c)：DYY-6B稳压稳流电泳仪 (南京大学（储平厂） （2）、 圆盘电泳槽装置一套 (南京大学（储平厂） （规格：12根玻管和6根玻管两种）； （3）、 磁力搅拌器 (上海沪西分析仪器厂 ) 90-1型恒温磁力搅拌器 （4）、 混 合 器 (上海沪西分析仪器厂) WH-3微型旋蜗混合仪 （5）、 天 平 （a）：BL-2200H,电子天平，最大称量2200克，感量：0.01g SHIMADZU CORPORATION （b）：BS110S, 电子天平，最大称量110克，感量：0.1mg Sartorius北京赛多利斯天平有限公司 3-2、实验器材： （1）、 可调自动取液器： a：微量取液器（10ul，20 ull） b：常量取液器（1000ul） （2）、 微量注射器：（5ul ；10ul； 25ul） （3）、 医用注射器：（10毫升或5 毫升二种） （4）、 8#针头 （5）、 有机玻璃凝胶小玻管架：(12孔 / 2排) （6）、 小玻管：（长：10cm，内直径：0.4cm和0.5cm） （7）、 量 筒：（250毫升， 100毫升 和10毫升）