中药活性指标成分阿克苷制备与鉴定.docVIP

附件1 中药活性指标成分阿克苷（Acteoside）的制备与鉴定 何江1，胡小鹏2，邱榕珠3,马文杰3，李涛2 深圳大学医学院 深圳大学生命科学学院 深圳大学化学与化工学院 摘要：本实验以苦丁茶木犀科植物紫茎女贞（Ligustrum purpurascens）叶为原料，通过高效快速的分离纯化方法，制备得到目标化合物。目标化合物经结构鉴定为阿克苷（acteoside）。 关键词：阿克苷 紫茎女贞 制备 鉴定 概述 阿克苷（Acteoside），又名洋丁香酚苷（《中华本草》）、洋丁香苷(《中药辞海》)、毛蕊花苷、马鞭草苷、麦角甾苷等。1963年罗马大学，M. L. Scarpati首先报道从植物Verbascum sinuatum中分离到阿克苷（acteoside）[1]。根据现有的文献查询分析，阿克苷广泛分布于双子叶植物中，含阿克苷的植物包括：唇 阿克苷（acteoside）分子结构 形科（Labiatae）15属41种，紫薇科（Bignoniaceae）4属5种，木犀科（Oleaceae）7属12种，列当科（Orobanchaceae）5属10种，玄参科（Scrophulariaceae）21属34种，马钱科（Loganiaceae）2属7种，马鞭草科（Verbenaceae）12属31种，车前科（Plantaginaceae）2属7种，爵床科（Acanthaceae）2属3种，木兰科（Magnoliaceae）1属2种，苦槛蓝科（Myoporaceae）1属1种，蓼科（Polygonaceae）1属1属，菊科（Compositae）1属1种，胡麻科（Pedaliaceae）1属1种，桔梗科（Campanulaceae）1属1种，胡椒科（Piperaceae）1属1种，苦苣苔科（Gesneriaceae）1属1种，蔷薇科（Rosaceae）1属1种，共计79属160种植物。现代药理研究表明阿克苷具有多种生理活性：抗氧化，抗病毒，保肝，抗肿瘤转移，抗炎，降血脂，抗菌，神经保护，降血压和心血管保护等[2]。由于阿克苷具有多种生理活性，且分布广泛，资源丰富，因此对其药用价值的研究已成为天然药物研发的新热点。阿克苷属新一类天然活性结构分子，随着药理研究的不断深入，必将为其带来广泛的临床应用前景。 阿克苷为苯丙素苷类成分，可溶于醇类有机溶剂，溶于水，极性大，阿克苷分子结构对热和光不稳定，分离纯化难度大。探索高效快速制备和鉴定的方法，有益于阿克苷的药物研究和开发。 实验部分 一、实验仪器及试剂 比旋度J―20C旋光光谱仪测定，紫外光谱用UV―210A型紫外光谱仪测定，红外光谱用IR―450型红外光谱仪测定，核磁共振谱用WH―400型核磁共振仪测定，FAB―MS用JAB―HS测定。 层析柱材料用硅胶，D101大孔吸附树脂，Sephadex LH-20。薄层层析用高效硅胶G板（HPTLC, silica gel, Merck）, 展开剂为CHCl3―MeOH―H2O (7:3:0.5)。有机溶剂用甲醇，乙醇和氯仿等。 二、提取及分离 称量482.3 g干燥的苦丁茶紫茎女贞（Ligustrum purpurascens）叶，剪碎，放入10 L加热回流提取磨口器皿中，加入5 L MeOH，加热回流2小时后，静置放凉，然后过滤，得提取液H1；随后，再重复操作一次，得提取液H2 (提取流程见图1)。合并两次提取液H1和H2, 并减压浓缩，得甲醇提取物395.5 g。在甲醇提取物395.5 g中加入4L纯净水，充分搅拌混匀，然后静置一小时，滤出上清液，如此反复操作三次，将所得的上清液合并，并直接上D101树脂（1500 g）层析柱分离。D101树脂层析柱分别用纯净水、50%甲醇和甲醇洗脱，得到三组馏分：A (23.5 g)，B (57.8 g)和C (11.3 g)。所得A、B、C三部分，经TLC检测 [硅胶G，展开系统CHCl3―MeOH―H2O (7:3:0.5)],B部分含有阿克苷。 B部分（57.8 g）经硅胶层析，干柱切割法，得到三部分：E (7.8 g)、F (12.1)和G（31.5 g）。将含有阿克苷的F部分进行硅胶柱层析，以CHCl3―MeOH―H2O溶剂系统洗脱得到7组馏分（如图1所示）。其中F3部分（3.2 g）再进行一次硅胶柱层析分离，得到粗品M 2.8 g。粗品M再经Sephadex LH-20柱层析纯化得到M 1.9 g。 三、纯度检测 经色谱层析纯化得到的M (1.9 g)，其纯度进行高效液相(HPLC)检测。检测条件为： 1. 仪器：安捷伦1200（Agilent 1200）高效液相仪 2. 检测波长：227 nm 3. 分析柱：C-18 column (Hypersil ODS, 250(4.6 MM） 4. 柱