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补肾化痰降浊方对高脂血症大鼠血管 平滑肌细胞增殖影响的实验研究 秦玖刚 周小琳苑明茹 张晓丽 周新强 (河南南阳医学高等专科学校·南阳473000) 摘要 目的：观察补肾化痰降浊方对高脂血症大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响。方法：健康 Wistar清洁级大鼠，分离大鼠胸主动脉，贴块法培养VSMC，抗仅一aetin的免疫组织化学染色鉴定细胞。 无血清培养液培养静止后，以20％胎牛血清(FBs)刺激VSMC增殖。实验分为空白对照组、补肾化痰降 浊方组，分别加入不同浓度的补肾化痰降浊方，以四甲基偶氮唑蓝(MTr)法观察药物对VSMC增殖的影 响。并用流式细胞仪检测VSMC细胞周期的变化。结果：经20％FBS刺激后，VSMC细胞增殖明显升高， 加入不同浓度的补肾化痰降浊方作用24小时后，细胞增殖明显下降，并呈一定程度的剂量依赖关系。随 着补肾化痰降浊方浓度加大，VSMC细胞周期分布发生变化，Co／C。期细胞比例增加，而合成增殖的S期 细胞比例减少，出现Go／G。期细胞周期阻滞。结论：补肾化痰降浊方对血管平滑肌细胞增殖具有抑制作 用，并呈剂量依赖关系，可能是其防治动脉粥样硬化(AS)及AS性疾病的部分作用机制。 主题词 高脂血症／中医药疗法@补肾化痰降浊方／治疗应用 平滑肌细胞增殖大鼠 补肾健脾、活血化瘀等法为中医临床常用治疗高脂血症 2～3天细胞贴壁生长，即可用于实验。第二代的VSMC长 的有效方法。本人自拟补肾化痰降浊方用于高脂血症治疗 满培养瓶约80％时，用PBS清洗，再用linl0．25％胰蛋白酶 有良好效果，本文探讨该方对高脂血症模型大鼠VSMC增殖37℃条件下消化2～3分钟，用吸管轻柔反复吹打，将细胞吹 的影响，报告如下。 散，接种于6孔培养板中经多聚赖氨酸预处理的盖玻片上， 1材料 静置4小时后加入培养液，镜下观察。当细胞铺满盖玻片 1．1 主要试剂 胎牛血清(FBS)：武汉三利生物工程材料 后，4％多聚甲醛固定，进行抗Of．一aetin细胞免疫组化染色， Anti— 研究所；四甲基偶氮唑蓝(Mar)：Sigma公司；Rabbit倒置相差显微镜观察VSMC的阳性表达。 2．2 ACTIN：武汉博士德生物工程有限公司；胰蛋白酶：Sigma公VSMC增殖的测定将细胞稀释为l×103·ml～，接 司；--甲基亚枫(DMSO)：Sigma公司；碘化丙啶(PI)：Sigma 种于96孔培养板，培养24小时，换成无血清的DMEM培养 公司；Rnase酶：美国进口分装；其余试剂均为国产分析纯。 液继续培养24小时，使细胞静止于Go／G。期。分为对照组 1．2主要仅器CK—TKe一3倒置相差显微镜：日本O-和不同浓度加药组。各组所用培养液均为含20％胎牛血清 LYMPUS；酶联免疫检测仪：芬兰ThermolIadmystenm；FACSC的DMEM培养液，补肾化痰降浊方的浓度分别为O、10、20、 Libur流式细胞仪：美国BD亚溯有限公司。 40mg／ml，每组设8个复孔，继续培养48小时。MTr法检测。 1．3 2．3 实验动物健康Wistar清洁级大鼠，体重约1809，由湖VSMC细胞周期的检测流式细胞仪检测。 北省预防医学院实验动物中心提供。 2．4统计分析所有检测数据以均数±标准差(王-1-s)表 1．4实验药物补肾化痰降浊方：由魔芋精粉、枸杞、茯苓、 示，采用SPSSl0．0统计软件包统计分析，以单因素方差分析 山楂、决明子、山药、制首乌、陈皮、制半夏、山茱萸组成，经水 和组问t检验进行统计学处理。 煎浓缩成19生药／ml。