二甲氧基硫代磷酸酯类农药多残留免疫分析方法研究.pdfVIP

第38卷 分析化学(FENⅪHuAxUE)研究报告 第11期 of 1550～1555 2010年11月 Chine∞Joumal Anal”icalChemistry DloI：lO．3724／SP．J．1096．2010．01550 二甲氧基硫代磷酸酯类农药多残留免疫分析方法研究 李永祥1 徐振林1 王弘1 雷红涛1 孙远明1 沈丹2 杨金易1 沈玉栋“ 1(华南农业大学食品学院，广东省食品质量安全重点实验室，广州510642) 2(广州市动物卫生监督所。广州510440) 摘要以二甲氧基硫代磷酸酯类农药为目标，设计合成了系列半抗原及抗原，制备了4种宽谱特异性抗体。 研究结果表明，含不饱和烷烃手臂的半抗原所制备的抗体宽谱特异性优于含酰胺键手臂的半抗原所制备的 抗体。采用目标待测物的特征“次级结构”作为包被半抗原可显著提高EusA检测灵敏度。经条件优化建立 的最佳间接竞争EuSA多残留检测方法可同时检测8种常用高毒农药，其检出限(LOD)在2．6— 104斗g／kg之间，符合相关限量标准要求。生菜样品药物添加平均回收率为73．9％～121．4％；平均相对标准 偏差为10．6％一18．4％。菜心样品药物添加平均回收率为80．4％一121．2％；平均相对标准偏差为 13．5％～24．4％。方法精密度均达到气相色谱法的检测水平。 关键词有机磷农药；多残留检测；异源包被；酶联免疫吸附分析 1 引 言 有机磷农药在农业生产中被广泛使用，促进了粮食生产…，但也造成了食物和环境中普遍存在有 机磷农药残留问题【2】。我国在2002年已经明令禁止或限制17种有机磷农药的使用，但有机磷农药引 起的中毒事件仍时有发生，需要加强对其监测。免疫分析方法被认为是一种灵敏、高效、低成本的农药 残留检测手段【3J。已有许多关于农药单残留免疫分析方法的报道【4“J，但有机磷农药种类多样且复配使 用现象严重，食品及环境样品常残留多种有机磷农药，建立农药多残留免疫分析筛检方法更具应用价值。 目前，针对二甲氧基硫代磷酸酯类农药进行宽谱特异性抗体制备已有报道，主要是以膦酸基或二甲 氧基硫代磷酸酯为半抗原基本结构制备直链型半抗原来制备宽谱特异性抗体¨’81，但灵敏度普遍偏低。 IJiu等【91制备了同时含二甲氧基硫代磷酸酯和苯环的通用半抗原，获得的抗体灵敏度有所提高，但其宽 谱特异性仍有待提高。本研究在探讨半抗原与抗体及酶联免疫吸附分析(EUsA)方法灵敏度的构效关 系基础上，采用特征“次级结构”异源包被策略，建立了灵敏度高，特异性识别谱宽，精密度达到气相色 谱检测水平的农药多残留EUsA检测方法，为进一步开发试剂盒奠定了基础。 2 实验部分 2．1仪器与试剂 (德国San耐us公司)；MODEL1575洗板机(Bio—Rad公司)。 农药标准品(德国Dr．Ehrensto疵r公司)；牛血清蛋白(Bovine∞mmalbuIIlin，BSA，肘w67000)、卵 清蛋白(ovalbuIIlin，OVA，肘w (IgG，武汉博士德生物工程有限公司)；其余化学试剂均为国产分析纯；叶菜类蔬菜为市售。 20lOJM旬1收稿；20lOJD6．18接受 2009BolJ 300005)和华南农业大学新学科扶持基金(No．5100·l(08198)资助项目 ·E-I珊lil：基he“yIldoIIg@$c鲫．edu．cn 万方数据 第1l期 李永祥等：二甲氧基硫代磷酸酯类农药多残留免疫分析方法研究 1551 2．2实验方法 2．2．1 半抗原设计与合成根据二甲氧基硫代磷酸酯类农药的结构特征，设计了系列含不同手臂及取 代位置的半抗原。其合成路线与结构如图l所示。其中H1’～}14’按照本研究前期研究报道m1方法合 成，H5’和R’一NH：为商品化试剂，半抗原H1一H7参照文献[11]方法合成。 3 2