表达鹅_干扰素基因重组禽痘病毒的构建及表达产物抑制鹅细小病毒活性的初步研究.pdfVIP

第34 卷 第12 期 中 国 预 防 兽 医 学 报 Vol. 34 ，No.12 2012 年 12 月 Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine Dec. 2012 doi: 10.3969/j.issn.1008-0589.2012.12.03 表达鹅α 干扰素基因重组禽痘病毒的构建及表达产物抑制 鹅细小病毒活性的初步研究 * 张 颖，高 旭 ，陈海迪，鲁 承 (延边大学农学院动物医学系，吉林延吉 133000) 摘 要：为研究表达鹅α 干扰素(GoIFN-α)基因重组活载体疫苗对抑制病毒增殖活性，本实验从植物血凝素 刺激的延边白鹅外周血淋巴细胞中提取总RNA ，采用RT-PCR 扩增gIFN-α 基因，其大小为576 bp 。将其与LacZ 表达盒串联克隆于pSY681 质粒中构建pSY681-IFN-α-LacZ 转移重组质粒。采用脂质体将重组质粒转染于预感染 禽痘病毒(FPV)017 株的鸡胚成纤维细胞(CEF) ，通过蓝/ 白斑筛选获得重组禽痘病毒rFPV-IFN-α 。采用间接免疫 荧光和western blot 方法对重组毒鉴定结果显示，GoIFN-α 基因在CEF 中获得表达，分子质量约为29 ku 。表达的 CoIFN-α 对鹅细小病毒在鹅胚成纤维细胞中的复制具有抑制作用。本研究为进一步开展GoIFN-α 基因重组FPV 活载体疫苗的体内试验奠定了基础。 关键词：延边白鹅；IFN-α ；重组禽痘病毒；抗病毒 中图分类号：S852.65 文献标识码：A 文章编号：1008-0589(2012)12-0942-04 Expression of goose interferon-α gene in recombinant fowlpox and detection for its activity against GPV * ZHANG Ying, GAO Xu , CHEN Hai-di, LU Cheng (Department of Veterinary Medicine, Agricultural College, Yanbian University, Yanji 133000, China) Abstract : To construct the recombinant fowlpox virus (FPV) expressing goose interferon-α (GoIFN-α) and evaluate its antiviral activity, the 576 bp GOIFN-α gene was amplified by RT-PCR from the total RNA of phytohemagglutinin (PHA) stimulated Yanbian white goose peripheral blood lymphocytes, which was ligated with LacZ cassette and clone into pSY681 vector to construct the recombinant transfer vector of pSY681-IFN-α-LacZ. The recombinant virus of rFPV-IFN-α was generated by transfection of the transfer vector into the pre-infected CE