血管内皮生长因子受体_2抑制剂高通量筛选模型建立和应用.pdfVIP

血管内皮生长因子受体-2 抑制剂高通量筛选模型的建立和应用 1 1 1 1 2 1* ， ， ， ， ， (1. ， 210009 ;2. 严明 王静宜 胡洁 苗靖姗 何玲 张陆勇 中国药科大学国家新药筛选实验室 南京 中国药科大学药学院 ， 211198) 药理教研室 南京 : (HTRF) -2 ， 摘要 目的 利用均相时间分辨荧光 技术建立血管内皮生长因子受体 抑制剂高通量药物筛选模型 从化合物样品 库中寻找小分子抑制剂。 20 L ，384 ， 方法 使用 μ 检测体系 低容量白板 采用均相时间分辨荧光技术对反应体系中的酶活性 ， 。 : ，ATP 进行荧光检测 进而评价待测样品的抑制活性 模型建立的体系优化包括如下实验步骤 酶浓度及反应时间优化 和底 物米氏常数测定， 、 SU54 16 IC ，Z 。 质控实验包括反应体系信噪比实验 抑制剂 的 测定 因子的测定 在建立稳定模型检测体系 50 之后， 10 560 ， IC 。 对本中心化合物库提供的 个样品进行活性筛选 并对部分活性化合物进行 50 的测定 结果 在血管内皮生长 -2 -2 0. 10 ng · L － 1 ， 15 因子受体 活性体系优化实验中求得血管内皮生长因子受体 激酶最适反应酶浓度为 μ 最适反应时间为 min ，ATP K = 0. 75 mol ·L － 1 ， K = 94. 90 nmol ·L － 1 ， :SA = 2 ∶ 1，Z 0. 85 ， IC = 1. 03 mol · m μ 底物 m 信噪比底物 值为 阳性药 50 μ L － 1 。 ， 3 S2-14 ，S2-16 、S2-38 IC 1. 01 × 10 － 4 ，6. 04 × 10 － 5 ， 通过部分初筛活性样品进行复筛研究 得到 个活性化合物 50 分别为 7. 23 × 10 － 6 mo