应用高效液相色谱(HPLC)测定氨基酸及其方法的简要评估.pdfVIP

维普资讯 兰兰 ! ．! ． ：_二 ： ：． 应用高效 液相 色谱 (HPLC) 测定 氨基酸及 其方法的 简要 评估 广 州呼吸病研究所 陈顺存 摘 要 高效液相色谱 (HPLC)枝术发展很快 ，过去做氨基酸分析必需应 用价格昂贵的专一的氨基酸分析仪。近几年来越来越多的人应用HPLC进行血 浆及其它生物体 液的氨基酸定量 分析，其优点是方法简单快速 ，一份标本能在 1～ 2小时 内完成，同~HPLC功能多样 ，只要配备多种 分析柱及测定器，其 捡 测功能更 多。因此HPLC适夸于临床实验 室配置，缺点是HPLC造价仍嫌过 高．一时难以推广。本文简略介绍了各种氨基酸反应试剂及其优缺点，并着重 介 绍 了反相OPA 法 。 液相色谱是一种比较古老的分离技术，但 分析的里程碑，但需时超过一天。60年代分析 自60年代后期以来发展非常迅速，l967~I-Iov 时间缩短至24小时以下，直至70年代离子交换 vathc发明 70um 的玻璃珠上覆盖离子交换 树脂出现，利用茚三酮和AA柱后反应使检测 树脂的薄壳型填料柱并应用高压输液泵和紫外 的灵敏度 已达到l0OPmol水平 ，但分析时间 检测器联成一个整体分离检测器称为高速液相 仍需几小时左右。70年代至本年代初，开始应 色谱 (Hi SreedLi0uidChromatography 用反相HPLC和柱前OPA (磷苯二甲醛)衍生 HSLC 或高压液相色谱 (HighPIessuFe 物进行氨基酸分析，把分析定量时间缩短至几 LiquidCfiromatographyHPLC)：70年代 十分钟，且灵敏度进一步提高。先进的HPLC 以后 由于各种分离柱填料的迅速发展 (5一l0 主要 由进样器，分离柱，高压泵和检测器组成， um 以及各种高灵敏度检测器 (如荧光分光 再联接一个微 电脑及终端，因此能全 自动化操 光度计等)和电脑控制器的应用．可在几十分钟 作．监测和计算结果，使精确性和重复性都提 内完成分析且其检测灵敏度达到1012或lO 高到一个崭新的阶段。 克水平．又称为高效液相色谱 (HighPelfor 氨基酸荧光染料衍生物 malK~ LiquidChr0matogra ly ，HPLC )： 本文仅结合我们应用HPLC对住院患者进 AA 的荧光衍生物极 大地提高了AA检测 行血浆游离氨基酸 (AA1营养分析时一些体 的灵敏度 ．一般可检测水平为1012～10—1M 。 会和对现有的HPLC检测AA的方法扼要的进 荧光试剂又分柱前衍生物和柱后衍生物 ．早期 行述评。 都应用柱后衍生物法 ，所谓柱后衍生物是指样 本经过高压分离柱 以后的组合再加荧光试剂例 氨基酸分析 简史 如茚三酮等形成荧光衍生物再流经荧光检测器 人们 自从认识到蛋 白质是 由氨基酸所组成 进行定量分析。而柱前衍生物法是利用检测样 不但细胞、组织含有氨基酸且体液 中亦含有游 本进样前先与荧光试剂例如oPA反应 形成 离氨基酸之后，对AA的代谢非常感兴趣．曾 AA和OPA衍生物后进样，分离后直接经X 使用了许多手段来定量分析AA，例如纸层析． 检测器中检测。后者反应快，要求条件简单， 电泳