固相萃取液相色谱法测定乳制品中三聚氰胺含量.docVIP

固相萃取—液相色谱法测定乳制品中三聚氰胺含量 [摘要】 目的：建立固相萃取高效液相色谱法测定乳制品中三聚氰胺含量的方法。方法：样品经三氯乙酸溶液-乙腈提取，离心后，取5 ml上清液于预平衡的Cleanert PCX固相萃取柱净化，浓缩后以乙腈—水溶液定容，过0.2um微孔滤膜，采用RP—HPLC—UV法测定，外标法定量。结果：试验对色谱分离条件进行了优化， 三聚氰胺(Melamine) 简称三胺 TDZ4A-WS型离心机（4000r/min）； MTN-2800D氮吹仪浓缩装置； ASE系列固相萃取装置； DT-230A柱温箱 Cleanert PCX 阳离子交换柱（60mg /3ml）。 甲醇、乙腈(色谱纯)， 三氯乙酸、辛烷磺酸钠、柠檬酸、氨水(含量约25%~28％)、RO DI超纯水； 三聚氰胺参考物质(含量超过99．5％) 二．实验部分 2. 1．1 标准储备液的配制 准确称取50mg（精确到0.1mg）三聚氰胺标准品于50ml容量瓶中，用甲醇一水(体积比为5：5)溶液定容，配制成浓度为1．0 mg／mL的标准储备液，于4℃避光保存。按实际检测需要，用乙腈-水（体积比2：8）溶液将储备液逐级稀释到相应的浓度，制成0.5mg/l; 1.0mg/l; 5.0mg/l; 10mg/l; 20mg/l;50mg/l; 100mg/l标准工作溶液。 2. 1. 2 重复性 取浓度为10mg/l的浓度标准溶液，重复进样6次，结果如下表： 项目 保留时间（min） 峰面积(10uAU*s) 一次进样 8.7430 61361.00 二次进样 8.7600 62827.00 三次进样 8.7480 62346.10 四次进样 8.7450 62390.80 五次进样 8.7550 62407.90 六次进样 8.7430 62574.10 RSD% 0.08 0.80 表 1 浓度为10mg/l标准溶液的重复性 图 1 浓度为10mg/l的标准溶液谱图 2. 1. 3 线性实验 取浓度为0.5mg/l; 1.0mg/l; 5.0mg/l; 10mg/l; 20mg/l; 50mg/l; 100mg/l标准工作溶液进行分析，并计算线性范围。 图 2 三聚氰胺线性曲线 三聚氰胺在0．5～100．0 mg／L的范围内，线性良好，相关系数r20.9999。添加水平为5．0 ～20.0mg／kg时，样品加标回收率为86％ ～89％ ，RSD5％。 2. 1. 4 最小检测浓度 乳制品中三聚氰胺的定量检测限(LOQ)是0.03 mg／kg 图 3 最小检测限 2. 2 空白实验 准确称取2g（精确到0.01g）水样于50ml具塞塑料离心管中，准确加入1%三氯乙酸溶液15mL和乙腈5mL，于漩涡混合器上混合5 min，超声提取20min，漩涡混合5 min，于4000 r／min速率下离心20 min，上清液经1%三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后，用1%三氯乙酸溶液定容至25mL，移取5ml滤液，加入5mL水混匀，过滤后分析，无峰。 2. 3 样品前处理 对不同品牌的纯牛奶及酸奶样品进行分析，样品分析图谱及结果如下： 项目 面积（10uAU·s） 含量(mg/kg) 1号样 2023.7 0.815 2号样 80.2 0.037 3号样 419.0 0.197 表 2 不同品牌液态奶中的三聚氰胺的含量 在1号样品中添加三聚氰胺标准溶液，添加水平为4.99，9.97，19.9 mg／kg，重复测定3次，计算其回收率和精密度，结果见表3: 样品空白值（mg/kg） 0.815 0.815 0.815 添加量（mg/kg） 4.99 9.97 19.9 检测结果（mg/kg） 5.245 9.409 18.608 5.225 9.416 18.643 5.297 9.410 18.648 回收率（%） 88.99 86.23 89.54 回收率范围（%） 86.23 ～ 89.54 相对标准偏差（%） 0.71 0.04 0.12 3. 实验结果 实验证明：采用LC100或EX1600高效液相色谱仪测定液态奶中的三聚氰胺，具有浓度低、精密度高、线性范围好及回收率高等优点，完全符合分析要求，适合食品中三聚氰胺的快速检测。