扶正解毒汤含药血清对镍转化细胞增殖抑制作用的研究.pdfVIP

扶正解毒汤含药血清对 镍转化细胞增殖抑制作用研究1 吕晓云，蒲晓丽，朱玉真，赵健雄，孙应彪 兰州大学中西医结合研究所，兰州（730000 ） E-mail ：lvxy@ 摘 要：目的 通过细胞培养方法，研究灌服中药扶正解毒汤（FJD ）后兔血清对镍转化细 胞（Nt16HBE ）增殖的抑制作用。方法 将FJD 血清作用于Nt16HBE 细胞7d ，分别以四甲 基固氮唑盐（MTT ）法、流式细胞仪（FCM ）及TRAP-PCR-ELISA 法检测FJD 血清对镍转 化细胞生长的抑制情况及其对核转录－kB （NF- κB ）、端粒酶活性变化的影响。结果 10 ％ 体积分数的高、中、低剂量FJD 血清对Nt16HBE 细胞生长以及NF- κB 、端粒酶活性均有 较强的抑制作用，且存在剂量－效应和时间－效应关系(P0.05~0.01)。结论 FJD 血清可显 著抑制镍转化细胞增殖，其机制与下调NF- kB 、端粒酶表达有关。提示FJD 具有一定的体 外拮抗镍致癌效应。 关键词：正解毒汤；含药血清；镍；细胞增殖；核转录因子- κB；端粒酶 镍化合物为人类Ⅰ类确证致癌物[1] 。多年来，国内外运用各种实验方法进行了大量有关 镍致癌的动物实验及职业病临床研究，取得了重要的进展。其中，体外镍暴露诱导细胞恶性 转化作为敏感的遗传终点之一，具有极高的可信度。许多实验室已建立了多种镍化合物诱导 啮齿类及浦乳类细胞恶性转化模型。同时，人们也在积极寻求有效的镍毒性包括镍致癌的干 预手段。近十六年来，本课题组运用扶正解毒汤（FJD ）进行了系统的镍毒性干预的体内动 物实验及临床研究[2，3] ，证实了该复方的有效性。本研究首次以经硫酸镍（NiSO4 ）诱导恶 [4]为研究目标，从体外途径观察 性转化的人支气管上皮（16HBE）细胞（简称 Nt16HBE ） FJD 对镍转化细胞增殖的抑制作用并探讨其作用机制，以期为该复方拮抗镍致癌性提供新的 理论依据。 1. 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 细胞及动物 16HBE 细胞及 Nt16HBE 细胞由广州医学院化学致癌研究所建系并惠赠。 纯种青紫兰兔 16 只，雄性，体重（2.1 ±0.3 ）kg ，由中国兰州生物制品研究所提供（合格证 号：14－004 ），常规饲养。 1.1.2 中药 扶正解毒汤 （FJD ）由红芪、茯苓、丹参、枸杞、当归、莪术、连翘按 4:4:3:3:2:2:2 组方，生药由甘肃省药材公司提供，经鉴定全部为道地药材。上药混合，加三蒸水煎煮，制 备成含生药 4g/ml 药液，40C 保存备用。 1.1.3 主要试剂及设备 MEM 培养基、胰蛋白酶（GIBCO 公司）；小牛血清（杭州四季青生 物工程材料公司）；MTT （Sigma 公司）；NF- κB P65 （Santa Cruz 公司）、二抗购自武汉博 士德公司；端粒酶活性检测试剂盒（武汉博士德公司）；CO2 恒温培养箱（MCO-15AC 型， 日本SANYO ），相差倒置显微镜（日本 OLYMPUS ），冷冻干燥机（FD-1 型，北京博医康技 术公司）。流式细胞仪（EPICS ELITE 型，美国 Coulter 公司）。酶标仪（HT Ⅲ型，奥地利 Anthos 公司） 1本课题得到教育部博士点专项科研基金（NO.20050730031 ）的资助。 -1- 1.2 方法 1.2.1 FJD 血清冻干粉制备 FJD 高、中、低剂量组分别以 FJD12 、6 和 3g ﹒kg-1 ﹒d-1 灌胃 （给 药中剂量＝临床常用量×动物等效面积系数×培养基内血清稀释度，高、低剂量分别为中剂 量乘以及除以 2 ），空白对照组予以生理盐水。各组每日分 2 次等体积灌胃（灌胃前禁食， 自由取水），共 3d，于末次灌胃后