miRNA-122促进小鼠胚胎干细胞源性肝前体细胞分化与成熟.pdfVIP

·１２６０· 中国病理生理杂志　ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＰａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ　２０１３，２９（７）：１２６０１２６７ ［文章编号］　１０００４７１８（２０１３）０７１２６００８ ｍｉＲＮＡ１２２促进小鼠胚胎干细胞源性 肝前体细胞的分化与成熟 △ 邓小耿 ，　邱荣林，　伍耀豪，　李治熹，　曾乐祥，　张　杰，　周嘉嘉，　唐　晶，　邓洁敏 （中山大学孙逸仙纪念医院小儿外科，广东 广州５１０１２０） 　　［摘　要］　目的：通过ｍｉＲＮＡ１２２（ｍｉＲ１２２）转染胚胎干细胞（ＥＳＣｓ）源性肝前体细胞，观察及评估其是否能 推进ＥＳＣｓ向肝细胞的分化过程。方法：采用丁酸钠、成纤维细胞生长因子４（ＦＧＦ４）及地塞米松（Ｄｅｘ）联合序贯 诱导小鼠ＥＳＣｓ使之初步分化为肝前体细胞，然后利用Ｇａｔｅｗａｙ技术构建出ｐＡＶ．Ｅｘ１ｄＣＭＶ＞ｍｉＲ１２２／ＩＲＥＳ／ｅＧＦＰ 重组腺病毒表达载体，使其转染贴壁诱导第９天的小鼠ＥＳＣｓ源性肝前体细胞，获得稳定高表达ｍｉＲ１２２的细胞后 继续培养。采用荧光显微镜观察转染后细胞形态的变化；使用ｒｅａｌｔｉｍｅＲＴＰＣＲ检测肝特异性基因的表达；免疫荧 光检测肝特异性蛋白表达水平；吲哚氰绿摄取实验、糖原染色及尿素合成功能实验检测肝细胞功能。结果：丁酸 钠、ＦＧＦ４及Ｄｅｘ联合序贯诱导可将小鼠ＥＳＣｓ成功地诱导为肝前体细胞。转染ｍｉＲ１２２后，细胞在形态学上更接 近成熟肝细胞；肝特异性基因白蛋白（ＡＬＢ）、甲状腺素运载蛋白、１抗胰蛋白酶、葡萄糖６磷酸酶、细胞角蛋白８、 α 胆固醇７ －羟化酶及细胞色素Ｐ４５０３Ａ４的ｍＲＮＡ表达均增高；肝特异性蛋白ＡＬＢ及细胞角蛋白１８均表达增高， α 而甲胎蛋白表达降低；吲哚氰绿摄取实验、糖原染色及尿素合成功能实验结果均显示转染ｍｉＲ１２２后肝细胞功能 较对照组明显增强。结论：丁酸钠、ＦＧＦ４及Ｄｅｘ联合序贯诱导可将小鼠ＥＳＣｓ成功地诱导为肝前体细胞；ｍｉＲ１２２ 能够有效地促进小鼠肝前体细胞的分化与成熟。 ［关键词］　胚胎干细胞；肝细胞；ｍｉＲＮＡ１２２ 　　［中图分类号］　Ｒ３６３　　　　　［文献标志码］　Ａ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００４７１８．２０１３．０７．０２１ ｍｉＲＮＡ１２２ｐｒｏｍｏｔｅｓｍｏｕｓｅｅｍｂｒｙｏｎｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｄｅｒｉｖｅｄｈｅｐａｔｉｃｐｒｅｃｕｒ ｓｏｒｃｅｌｌｓｔｏｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｉｎｔｏｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ ＤＥＮＧＸｉａｏｇｅｎｇ，ＱＩＵＲｏｎｇｌｉｎ，ＷＵＹａｏｈａｏ，ＬＩＺｈｉｘｉ，ＺＥＮＧＬｅｘｉａｎｇ，ＺＨＡＮＧＪｉｅ， ＺＨＯＵＪｉａｊｉａ，ＴＡＮＧＪｉｎｇ，ＤＥＮＧＪｉｅｍｉｎ （ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｅｄｉａｔｒｉｃＳｕｒｇｅｒｙ，ＳｕｎＹａｔｓｅｎＭｅｍｏｒｉａｌＨｏｓｐｉｔａｌ，ＳｕｎＹａｔｓｅｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０１２０，Ｃｈｉｎａ．Ｅ ｍａｉｌ：ｄｅｎｇｘｉａｏｇｅｎｇ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ） 　　［ＡＢＳＴＲＡＣＴ］　ＡＩＭ：ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｗｈｅｔｈｅｒｍｉＲＮＡ１２２（ｍｉＲ１２２）ｐｒｏｍｏｔｅｓｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｍｏｕｓｅｅｍｂｒｙ ｏｎｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌ（ＥＳＣ）ｄｅｒｉｖｅｄｈｅｐａｔｉｃｐｒｅｃｕｒｓｏｒｃｅｌｌｓ（ＨＰＣｓ）ｉｎｔｏｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ．ＭＥＴＨＯＤＳ：ＭｏｕｓｅＥＳＣｓｗｅｒｅｉｎｉｔｉａｌｌｙ ｉｎｄｕｃｅｄｔｏｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｉｎｔｏＨＰＣｓｂｙｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｗｉｔｈｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ４（ＦＧＦ４），ｓｏｄｉｕｍｂｕｔｙｒａｔｅａｎｄｄｅｘａｍｅｔｈａ ｓｏｎｅ（Ｄｅｘ）ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌｌｙ．ＴｈｅｎａｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔａｄｅｎｏｖｉｒｕｓｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇｖｅｃｔｏｒｐＡＶ