健脾中药改善去势大鼠维生素D代谢的研究论文.pdfVIP

中华中医药学会骨伤分会第四届第二次学术大会论文汇编 健脾中药改善去势大鼠维生素D代谢的研究’ 上海中医药大学附属曙光医院上海市中医药研究院骨伤科研究所 王翔+赵咏芳石印玉詹红生曹月龙徐字 前言： 中医药防治原发性骨质疏松症的研究已经进行了多年，国内已有成药上市并应用于临床实践。 回顾这些药物不论是复方还是单味中药的提取物都是从中医理论“肾主骨”出发，以“补肾”组方 遣药，但仅仅从补肾来论治骨质疏松症，局限中医治疗本病的疗效，我国著名中医专家岳美中曾就 脾肾关系作了精辟的论述：“人之始生，先成于精，精气旺而后有脾胃，即所谓先天生后天，人之衰 老，肾精先枯，累及诸脏，此时全赖脾胃运化、吸收精微。使五脏滋荣，元气得继，才能却病延年， 即所谓后天养先天”“’，《素问．生气通天论》日：“是故谨和五昧，则骨正筋柔，气血以流，腠理以 密，如是则骨气以精，谨道如法，长有天命。”可见脾、肾和骨的关系十分密切。而且骨质疏松症作 为一种全身性功能衰退产生的疾病，是全身老年退行性改变在骨骼系统的反映，元气的亏虚是机体 衰老的根本，后天元气的充养依赖于脾的健运，因此健脾法应该是防治骨质疏松症的另一治疗大法。 1材料和方法 1．1材料与方法： ’动物的分组，手术与用药：12月龄清洁级雌性SD大鼠40只，随机分为4组。手术摘除双侧卵 巢(假切组于同等条件下取大小相当的脂肪各一块)。术后，给予青霉素5万单位／只，肌肉注射3 天。大鼠摄食为无菌标准饲料和自来水。大鼠给药剂量根据临床用药剂量折合体表面积计算，假切 组、模型组以生理盐水2ml／日灌胃。见表1 表l动物分组、手术、给药和处死情况 1t2观察指标： 1．2．1骨密度测定：实验动物以DPX—L型双能x线骨密度仪作骨密度(BMD)测定。 1．2．2光镜观察：大鼠处死后每组取左侧胫骨标本。去除附着软组织，10％福尔马林周定，5％硝酸脱 钙液脱钙，组织脱水、透明、包埋，切片，HE染色。 ‘基金项目：国家自然科学基会资助项目30500674) J：海l}f重点学科资助项目(T0303) 教育部博七点基金资助项同(20040268012) 上海市肩明星计划资助项目(04QMXl434) 15l 中华中医药学会骨伤分会第四届第二次学术大会论文汇编 1．2．3尿PYD的测定：尿液于处死前～天代谢笼中收取，4℃保存，第二天采用双抗夹心ELISA法， BioMeditech 试剂盒购于LIFEKEY 标准曲线。数据用均数±标准差表示，组间差异性通过方差分析进行判断。血清BGP检测：实验动 物统一处死，腹主动脉取血，4C保存，第二天采用竞争放射免疫分析法，试剂盒购于中国原子能科 学研究院同位素研究所，编号IMK468，批内CV％≤5．0％，批间CV％≤10％，灵敏度0．35ng／ml。 1．2．4大鼠血清l，25(OH)：D。的测定：放免试剂盒购于美国Biosource公司。 PCR扩增仪上行半定量RT-PCR。取总RNA buffer 扩增。扩增体系：lOXPCR 5ul，dNTP 以B-actin基因作为内参照。扩增产物经1．2％琼脂糖电泳，凝胶成像系统测定光密度，分别计算与 ACTTTGACCGGCACGTG一3’，5’一ATCATCTCC B-actin基因的光密度比值。VDR引物：5’一GTG TAGCACCATGAAGAT CGCAGCTCA CTCTTACGCTG-3’。13-actin-I：5’一TCC C一3’，5’一AAA ACA ATGTCACGCACGATTTC一3’，5’一TGTCCCTGTATGCCT GTA G-3’，B-actin-2：5’一TTG CTG GT-3’。引物见参考文献侄’，订购于赛百盛公司，无杂质。 1．3统计学处理：应用spsslO．0统计软件对结果进行组间方差分析，以均数±标准差(X±s)，P 0．05为差异有显著性。 2结果 2．1药物对大鼠股骨骨密度的影响：与假切组比较，模型组