虾夷扇贝外套膜和肾脏组织cDNA文库构建以及EST的初步分析.pdfVIP

第17卷第3期 中国水产科学 Vol.17 No.3 2 0 1 0 年 5 月 Journal of Fishery Sciences of China May 2010 虾夷扇贝外套膜和肾脏组织cDNA 文库构建以及EST 的初步分析 1 1 1 1 1，2 1，2 1 1，2 李云峰 ，刘卫东 ，高祥刚 ，李文姬 ，刘莹 ，傅立元 ，李宏俊 ，王健 ， 1 1 鲍相渤 ，赫崇波 （1.辽宁省海洋水产科学研究院，辽宁省海洋水产分子生物学重点实验室，辽宁 大连 116023； 2. 辽宁师范大学 生命科学学院， 辽宁 大连 116029） 摘要 ：利用SMART cDNA文库构建试剂盒首次构建了健康虾夷扇贝（ ）外套膜和肾脏2种组织 Mizuhopecten yessoensis 6 6 的cDNA文库。2个文库容量分别为2.30×10 CFU/mL和1.20×10 CFU/mL，重组率均超过98%，平均插入片段长度均 大于1 kb，文库质量符合标准要求。将随机选取的4 009个克隆进行5 端测序，得到3 884个有效序列 （外套膜923个， ′ 肾脏2 961个），测序成功率96.9%。经过质量控制和拼接，共得到2 007条单基因簇 （Unigenes），包含363个序列重叠群 （Contigs）和1 644条单一序列 （Singletons）。通过BLASTx和BLASTn有哪些信誉好的足球投注网站比对，共有659个Unigenes （外套膜157个；肾脏 -5 502个）获得了基因注释（ e ），占Unigene总数的32.84%。对Unigene的功能和分类进行了初步分析，发现多种与免 E 疫相关的基因，如凝集素、超氧化物歧化酶、溶菌酶、大防卫素等。利用SSRIT在线工具对2 007条Unigene查找微卫星， 发现有69个EST中含有微卫星序列，其中40个可以用于引物设计。虾夷扇贝cDNA文库的成功构建，为进一步的EST分 - 析、功能基因的表达和克隆、多态性EST SSR的筛选以及虾夷扇贝分子遗传学研究、种质资源评价和分子选育等奠定了 [ ] 基础。 中国水产科学，2010，17 （3）：578-585 - 关键词 ：虾夷扇贝；cDNA文库；免疫相关基因；EST SSR 中图分类号：Q959.215　　　　　 文献标识码 ：A　　　　　　文章编号 ：1005-8737- （2010）03-0578-08 虾夷扇贝 （ ）原产于日本 扇贝免疫相关基因进行筛选和克隆，并研究扇贝的 Mizuhopecten yessoensis 北部及俄罗斯远东地区沿海水域，具有生长快、肉味 免疫反应特征和抗病机制 [5-8] 。本研究首次建立了 鲜美、经济价值高等特点，已成为中国北方主要的经