高压氧对结肠癌LoVo细胞周期影响.pdfVIP

高压氧对结肠癌LoVo细胞周期的影响1 1 2 2 1 张伟 ，张丽达 ， 汪爱国 ，黄培林 １东南大学基础医学院病理生理学系（210009 ） ２东南大学附属中大医院高压氧科（210009 ） E-mail ：hpl@ 摘要：目的 探讨高压氧(HBO) 对结肠癌（LoVo ）细胞周期的影响。方法 应用流式细胞仪 检测不同压力及时间高压氧暴露后 LoVo 癌细胞的细胞周期的改变。结果 ① 0.2 Mpa HBO 可使 LoVo 细胞在细胞周期 S 期细胞积聚，并与 0.15 Mpa、0.25 Mpa HBO 暴露组比较，差 异具有显著性（P0.01 ）；②0.2 Mpa HBO 暴露后 24h 组 S 期细胞积聚明显高于 HBO 暴露后 12h 和 48h 组（P0.01 ）；③0.2Mpa HBO 暴露后 24h 组的 S 期细胞积聚高于其它组别 （P0.01 ）。结论 高压氧可诱导肿瘤细胞进入细胞周期并在 S 期细胞积聚，细胞周期同步化 提示高压氧可作为大肠肿瘤放疗和化疗的辅助治疗。 关键词: 高压氧，细胞周期，肿瘤细胞 高压氧（Hyperbaric oxygen, HBO）作为一种辅助治疗手段已广泛应用于临床[1-4]，但 有关 HBO 对肿瘤作用的基础和临床研究并不多见。细胞周期同步化（cell cycle synchronization）指将细胞群体阻留在细胞周期同一时相的方法。通过促进细胞积聚在细胞 周期某一时相，并给予细胞周期特异性化疗药物来阻止肿瘤细胞的无限增殖，提高化疗药物 对肿瘤细胞的杀伤作用，增加化疗药物的疗效，是肿瘤治疗领域中的值得探讨问题。本文通 过细胞培养和流式细胞仪检测技术，探讨不同压力及不同作用时间 HBO 对大肠癌细胞（LoVo） 细胞周期同步化的影响。 1.材料和方法 1.1 实验材料 1.1.1 实验细胞系 人结肠癌细胞（LoVo）株，由南京八一医院生化实验室惠赠。细胞培养于含 10%小牛血 清的RPMI1640 培养液（pH7.2）中，在 37℃、5%CO2充分湿度条件下培养，细胞呈单层贴壁 生长,每 2-3d传代一次。传代时用 0.25%胰酶室温下消化 1-2 min，选用对数生长期细胞用 于实验。收集并调整细胞数为 1.0×106/ml。 1本课题得到南京市社会发展科技计划（200401070-3），江苏高校高新技术产业发展项目 （ HJ03-059）资助 1 1.1.2 主要试剂和仪器 RPMI1640 培养基（美国 GIBCO 公司）、小牛血清（杭州四季青公司）。DWC150-300 型 动物实验舱为上海 701 所产品。FACS Calibur 流式细胞仪（美国 Bectionj-Dickinson 公 司产品）。 1.2 实验方法 1.2.1 HBO 处理 实验开始前用紫外线消毒氧舱 20min，纯氧洗舱 10min。各组细胞无菌状态下平放在舱 内，15min内缓慢升压至实验所需的压力（0.15Mpa、0.2 Mpa、0.25 Mpa）后稳压，HBO暴露 60min，减压 15min。HBO暴露过程中保持持续通风，纯氧流量 2L/min。出舱后置CO2培养箱 继续培养。 1.2.2 实验分组 依据所给压力不同将呈对数生长期LoVo细胞为 5 组：①正常对照组：即不作HBO暴露； ②常压常氧组：HBO压力为 0.1Mpa；③HBO-A组：HBO压力为 0.15Mpa；④HBO- B组：HBO压力 0.2Mpa；⑤HBO-C组：HBO压力 0.25Mpa。依据实验设定的时间不同将呈对数生长期LoVo细胞 为 4 组：①正常对照组：对数生长期细胞置CO2培养箱培养 0 小时；②HBO暴露后 12h 组，即 将细胞暴露HBO（见HBO处理）后，置CO2培养箱继续 1