脂脉宁胶囊抗动脉粥样硬化机理研究及对血管内皮细胞保护作用.pdf

摘要 动脉粥样硬化(AS)是严重危害人类健康的常见疾病，常累及心、脑血管 等重要部位而导致严重后果。近年来随着我国社会经济的发展，人们生活水平的 提高，而正呈上升趋势。因此，抗AS的研究已引起医学界的的高度关注。 本文从文献研究、实验研究和临床研究三方面，采用细胞培养、动物实验及 及临床颈动脉粥样硬化患者(CAS)观察对AS的有关发病机制进行分析，对脂 脉宁胶囊抗AS的作用机理进行探讨。 一、文献研究 动脉粥样硬化的发病与脂质代谢异常、高血压、吸烟、糖尿病、肥胖、遗传 等因素有关，是被公认的重要危险因素。近年来的研究又发现和确认了一些新的 危险因素，如高同型半胱氨酸血症、脂蛋白和三酰甘油、凝血和纤溶系统功能异 常、感染和炎症反应、氧化应激等。其他如细胞的增殖与凋亡，AS相关基因如 II、内皮素及一氧化氮等的异常表达皆与AS LDL．R、Ox。LDL、VCAM．!、Ang 的发生、发展密切相关。 综合现代中医各家观点，认为动脉粥样硬化属于中医学的痰证、瘀证，脉痹 等范畴，多因嗜食膏粱厚味，脏腑功能失调，及先天禀赋等因素致使痰浊内生， 壅塞脉道，血运不畅而致。辨证以痰浊、瘀血或痰瘀互结为主。治疗多以祛痰化 瘀为主，或兼扶正，或理气，或清热等。 二、实验研究 1 脂脉宁对香烟提取物(CSE)诱导VEC．304细胞损伤的保护作用 目的采用药理血清学方法，观察脂脉宁药物血清对CSE诱导VEC-304细 胞的存活率和凋亡率、细胞凋亡蛋白表达及细胞裂解液中氧化应激反应的影响。 方法用SD大鼠制备脂脉宁药物血清和空白血清。将VEC．304细胞分4组： ①对照组：细胞加空白血清；②CSE组：细胞加空白血清加csE：③实验1组： 细胞加药物血清加CSE；④实验2组：细胞加空白血清与药物血清(各半)加 T-AOC、NOS活性及MDA、GSH含量。 结果：对照组细胞存活率91．3％，凋亡率11．2％；CSE诱导组分别为61．6％， CSE组升高，凋亡率降低(Po．05～0．01)；且有一定的量效关系。 著性差异(Po．05-4)．01)。 2脂脉宁药物血清对H202诱导VEC-304细胞凋亡及氧化损伤的影响 方法：将VEC-304细胞分为4组：①对照组：细胞加空白血清；②H20|组： 细胞加，空白血清加0．5mmol／L的H202；③实验l_组：细胞加药物血清加 0．5mmol／L的H202。培养48h后，弃去上清液，收集各组细胞分别制成细胞滴 片、细胞裂解液，提取DNA和蛋白质，用免疫组化，TUNEL和Ladder等方法 进行细胞凋亡率、存活率、凋亡蛋白表达及氧化指标的检测。 结果：H202组VEC-304细胞存活率最低，凋亡率最高，与对照组比有明显 差异(P0．01)；脂脉宁可明显提高H202诱导细胞的存活率，降低凋亡率。与 Bcl．2、Bax、Caspase．3、NF-kB的表达有明显差异(P0．05～0．01，)。 质过氧化损伤。大小剂量抗氧化能力有差异。 方法：采用免疫组化，TUNEL和Ladder试验，SD大鼠制备脂脉宁药物血 脂脉宁药物血清的干预作用。 提示细胞在香烟提取物的刺激下，NF-kB、HSP．70的表达均被激活而明显上调。 2 用脂脉宁药物血清处理的实验1组和2组均能使香烟提取物诱导的VEC．304细胞 损害有保护作用。实验1组和2组比，NF．kB的下调有显著性意义(P0．05)，表 明脂脉宁有剂量依赖关系。Westemblot分析显示，CSE组与对照组比，HSP一70、 HSP．70、NF-kB的阳性条带与13-actin的比值均降低(Po．01)。 4．脂脉宁对AS家兔氧化应激反应及LDL-R、VCAM．1基因表达的影响 方法高胆固醇复制家兔AS模型，于第4周形成高脂血症后同时灌胃脂脉 宁8周。实验共12周结束采血测血脂，采用组织原位杂交、免疫组织化学等方 高胆固醇复制的模型组及给予脂脉宁的实验1、2组血清TC、TG、HDL、 组虽高于空白组，但与模型组比则明显降低(P0．0I)。实验1、．2组相比，TC、 TG、LDL的降低有显著性差异。 高，可能是AS家兔在高度氧化应激状态下的代偿性升高，为自我调节的应对机 制。结果提示脂脉宁有明显的抗氧化作用 空白组家兔主动脉结构正常，内膜完整，中膜弹力纤维正常；模型组主动 脉内膜明