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实验13 离体叶绿体对染料的还原作用
目的
了解希尔反应。
二、仪器及药品
分光光度计、烧杯、试管、移液管、容量瓶
0.1mol/L磷酸缓冲液、pH7.3
0.3mmol/L 2.6一二氯酚吲哚酚钠：称取0.0087g二氯酚吲哚酚钠定容至100ml。
三、原理
分离的叶绿体能使染料2.6一二氯酚吲哚酚进行需光还原作用，使染料从蓝色变为无色，这些变化在2—3分钟内呈线性关系。
2H+（H2O光解过程)
氧化型2.6一二氯酚吲哚酚 还原型2.6一二氯酚吲哚酚
(蓝色) (无色)
四、方法步骤
加样，取干净试管3支，按下表加入样品及其它试剂。
管号 0.1mol/L磷酸缓冲液 叶绿体悬液
（ml） 煮沸
（分钟） 0.3mol/L二氯酚吲哚酚 1 9.4ml 0.1ml — 0.5ml 2 9.4ml 0.1ml 5′ 0.5ml 3 9.4ml 0.1ml — —
注意：（A）叶绿体悬液为前一实验所制备
（B）2号管加叶绿体悬液后于沸水浴上煮5分钟。
（C）3号管内调零点作对照
（D）各试管都在最后加入二氯酚吲哚酚，且加入后立即摇匀此色。
（2）比色。将上面的各试管液分别倒入比色杯中，立即在721分光光度计（波长620nm下）进行测定，读出光密度，然后将比色杯取出放在光下照光，约30秒钟，再测定光密度（以上设定步骤可进行3—4次）。
五、实验报告
作出叶绿体对染料的还原作用的曲线图。
六、思考题
分离的叶绿体在无光的条件下能还原2.6一二氯酚吲哚酚吗？
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